TF-Ⅶa活化PAR2促進(jìn)SW620細(xì)胞增殖遷移的機(jī)制探討.pdf

1、目的：探討相關(guān)凝血因子對蛋白酶激活受體2(PAR2)的激活作用；初步探索TF—Ⅶa激活PAR2而促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞株SW620細(xì)胞增殖與遷移的作用機(jī)制及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。 方法：以PAR2激動劑(PAR2-AP)作為激活PAR2的參照，利用不同濃度及不同組合的凝血因子Ⅶa、Ⅹ、Ⅱa及抗組織因子(tissuefactor，TF)、抗PAR2抗體等處理SW620細(xì)胞，采用ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清白細(xì)胞介素8(IL-8)水平，從而評價

2、各種凝血因子對PAR2的激活作用；以定量PCR(Q—PCR)重點檢測因子Ⅶa對細(xì)胞表達(dá)IL-8、TF及半胱氨酸蛋白酶7(caspase-7)mRNA水平的影響，同時以Ⅹa生成法檢測因子Ⅶa對細(xì)胞TF活性表達(dá)的影響，從而分析TF—Ⅶa促進(jìn)SW620增殖與遷移的作用機(jī)制；進(jìn)一步采用Western—blotting分析TF—Ⅶa激活PAR2后細(xì)胞絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化的改變，初步探討PAR2活化后涉及的相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。

3、 結(jié)果：(1)在因子Ⅹ(100nM)存在條件下，血漿濃度(100pM)的凝血因子Ⅶa能夠促進(jìn)SW620細(xì)胞IL-8的表達(dá)，單克隆抗TF或抗PAR2抗體均可抑制TF—Ⅶa—Ⅹ的作用；(2)較高濃度(10nM)，的因子Ⅶa單獨作用即可上調(diào)SW620細(xì)胞IL-8分泌；(3)凝血酶(即因子Ⅱa)輕微下調(diào)SW620細(xì)胞IL-8表達(dá)，Hirudin、抗PAR1或抗PAR2抗體均可阻斷Ⅱa作用；(4)因子Ⅶa(10nM)除上調(diào)SW620細(xì)胞IL

4、-8蛋白表達(dá)外，同時也上調(diào)細(xì)胞IL-8與TFmRNA表達(dá)及TF活性，下調(diào)細(xì)胞caspase-7mRNA表達(dá)及p—p38MAPK水平。單克隆抗TF或抗PAR2抗體均可抑制Ⅶa的作用。 結(jié)論：TF—Ⅶa及TF—Ⅶa—Ⅹa復(fù)合物，而非Ⅱa，可活化結(jié)腸癌細(xì)胞株SW620細(xì)胞表面受體PAR2。TF—Ⅶa通過活化PAR2上調(diào)SW620細(xì)胞IL-8、TF表達(dá)、下調(diào)caspase-7表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖與遷移能力，p38MAPK在此過程中起負(fù)