TWEAK促進人肝星狀細胞遷移及其機制探討.pdf

1、背景:肝纖維化是多種慢性肝病進展至肝硬化的中間過程，它的各種并發(fā)癥嚴重的影響著慢性肝病病人的生活質(zhì)量及預后。目前為止，肝纖維化的治療仍沒有效果確切的藥物。肝星狀細胞(hepatic stellate cells，HSCs)的活化是肝纖維化發(fā)生發(fā)展過程的核心環(huán)節(jié)，其活化后合成大量細胞外基質(zhì)，為肝硬化假小葉的形成創(chuàng)造條件?；诖?，活化的HSCs自然成為逆轉(zhuǎn)肝纖維化的重要靶點。腫瘤壞死因子樣弱凋亡誘導因子(Tumor necrosis fac

2、tor-like weak inducer ofapoptosis，TWEAK)是一個多功能的細胞因子，有促炎、血管再生及調(diào)節(jié)細胞生長、發(fā)育及凋亡的作用。在肝再生時，已有研究表明TWEAK在肝臟中的主要功能是促進肝臟原始細胞的增值，而TWEAK在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用仍沒有被探討。
　　目的:本研究通過觀察TWEAK對人肝星狀細胞株--LX-2細胞增殖、細胞周期、細胞凋亡、遷移能力的影響，并探討其中的機制，以期為肝纖維

3、的治療提供分子靶點依據(jù)。
　　方法:用不同濃度TWEAK培養(yǎng)LX-2細胞24 h或48 h，采用CCK-8法檢測TWEAK對LX-2細胞增殖的影響，流式細胞術(shù)檢測細胞周期和細胞凋亡，Transwell小室檢測LX-2細胞遷移能力。實時定量多聚酶鏈式反應(yīng)和蛋白印記用于檢測基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)、α-SMA、vimentin和desmin的表達，酶聯(lián)免疫吸附試驗用于檢測MMPs的

4、活性。運用siRNA技術(shù)對LX-2中的MMP9和p65的表達進行干擾。運用鬼筆環(huán)肽染色對LX-2的形態(tài)進行觀察。
　　結(jié)果:與對照組相比，20 ng/mL、40 ng/mL和100 ng/mL TWEAK都能明顯的增強LX-2細胞的遷移能力，且100 ng/mL較40 ng/mL TWEAK作用更強;40ng/mL、100 ng/mL TWEAK對LX-2細胞的增殖、周期及凋亡無明顯影響。TWEAK明顯增加了MMP7、MMP8、M

5、MP9和MMP13的表達，并且使MMP9的活性增強，使用MMP9 siRNA將MMP9干擾之后，減弱了TWEAK促進的LX-2細胞的遷移;進一步研究發(fā)現(xiàn)，TWEAK通過活化經(jīng)典的NF-κB信號通路進而增加MMP9的表達。同時發(fā)現(xiàn)，TWEAK增加了LX-2細胞中活化肝星狀細胞的分子標志α-SMA、vimentin和desmin的表達，并且改變了LX-2的細胞形態(tài)。
　　結(jié)論:TWEAK通過NF-κB/MMP9信號通路增強LX-2細胞