抗腫瘤藥物夫拉平度腸道處置機(jī)制及代謝種屬性別差異.pdf

1、夫拉平度（FLAP，5，7-二羥基-2-（2-氯苯基）-8-[(3S，4R)-3-羥基-1-甲基-4-哌啶基]苯并吡喃-4-酮），為半合成黃酮，最初來源于一種印度植物[1,2]。夫拉平度抗腫瘤的機(jī)制是直接抑制CDK的活性[3,4]，抑制腫瘤細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，包括白血病細(xì)胞、食道和胃癌細(xì)胞等[2-4]。目前夫拉平度已進(jìn)入臨床Ⅱ期試驗(yàn)[5-8]。
　　 夫拉平度的應(yīng)用方案有多種:24h和72h持續(xù)注射給藥(CIVI)[7,

2、9]、每天注射1次，每次1h，連續(xù)3d(IVB)[7]、持續(xù)注射給藥4h后，每天注射1次，每次0.5h[5,6,8,10,11]。在所有的應(yīng)用方案中，靜脈注射是唯一的給藥方式，但是，持續(xù)注射給藥操作不方便并且會降低病人的順應(yīng)性。此外，在研究夫拉平度毒性實(shí)驗(yàn)時可以觀察到嚴(yán)重的痢疾等不良反應(yīng)[5-8]。相反，口服給藥是一種安全、方便和順應(yīng)性高的治療方法，特別是對于消化道癌的治療，口服給藥能直接作用于靶組織，是一種更理想的治療方式。
　

3、　 理想的生物利用度是夫拉平度口服給藥有效的根本。據(jù)以往文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，黃酮類化合物易被Ⅱ相代謝酶尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGTs)和磺酸轉(zhuǎn)移酶(SULTs)代謝，生物利用度極低(＜10％)[12]。夫拉平度母核為黃酮，但在8位上連接了一個雜環(huán)，結(jié)構(gòu)的改變可能會影響夫拉平度的吸收和代謝特征，從而改變它的生物利用度。研究證實(shí)，夫拉平度可經(jīng)小鼠肝代謝生成M1和M2兩個代謝物，主要經(jīng)膽道排泄[1]。UGT1A9是夫拉平度葡萄糖醛酸化主要的代謝

4、酶[13,14]。目前尚未有關(guān)于夫拉平度口服生物利用度及其腸吸收代謝的文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。
　　 本研究的主要內(nèi)容包括(1)夫拉平度的溶解度、穩(wěn)定性和吸附性的考察。(2)夫拉平度采用口服、靜脈分別給藥SD大鼠，觀察大鼠體內(nèi)血藥濃度的變化，考察生物利用度。(3)采用Caco-2細(xì)胞模型，研究夫拉平度腸吸收特征。(4)采用SD大鼠在體腸灌流模型，研究夫拉平度在SD大鼠的腸吸收代謝特征。(5)考察夫拉平度在五種雄、雌動物肝微粒體中的代謝及其種屬

5、差異和性別差異。
　　 1.夫拉平度的溶解度、穩(wěn)定性和吸附性的考察
　　 為了防止藥物溶解性、穩(wěn)定性和吸附性影響實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，我們考察了夫拉平度的這些性質(zhì)。結(jié)果表明夫拉平度在HBSS溶液中40-0.625μM濃度范圍內(nèi)完全溶解，穩(wěn)定性也完全滿足吸收代謝實(shí)驗(yàn)研究的需要，且實(shí)驗(yàn)中使用到的硅膠管和EP管對其沒有吸附性。
　　 2.夫拉平度在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究
　　 采用LC/MS法測定了血清中夫拉平度

6、的濃度，紫外檢測波長為273nm，質(zhì)譜離子源為電噴霧離子源(ESI)，采用正離子檢測方式，一級全掃描質(zhì)譜及選擇離子全掃描二級質(zhì)譜（fullscanMS2）兩種方式同時測定。夫拉平度的血藥濃度在0.002～2.63μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2=0.9996)，并用同法測定了SD大鼠口服、靜脈給藥夫拉平度后的血藥濃度及藥代動力學(xué)參數(shù)，靜脈給藥夫拉平度3mg·kg-1后，T1/2為173.73±31.97min，血藥濃度曲線下面積A

7、UC0-∞為64.54±10.38mg·min·mL-1?？诜蚶蕉?mg·kg-1后的藥代動力學(xué)參數(shù)分別為Cmax:127.52±45.54ng·mL-1，Tmax:18.00±6.71min，血藥濃度曲線下面積AUC0-∞為48.98±11.88mg·min·mL-1;口服夫拉平度12mg·kg-1后的藥代動力學(xué)參數(shù)分別Cmax:1317.35±150.72ng·mL-1，Tmax:11.00±5.48min，血藥濃度曲線下面積A

8、UC0-∞為200.36±60.51mg·min·mL-1。在SD大鼠中夫拉平度的生物利用度為75.89％，可見夫拉平度的生物利用度高。
　　 3、夫拉平度在Caco-2單細(xì)胞層模型上的吸收特征研究
　　 采用UPLC法測定透過Caco-2單細(xì)胞層的夫拉平度濃度并計(jì)算其表觀滲透系數(shù)(P)。當(dāng)夫拉平度濃度為10μM時，P從基頂側(cè)(A)到基底側(cè)(B)為0.47×10-5cm·s-1，從B到A側(cè)為1.53×10-5cm·s-1

9、，其PB-A/PA-B比值為3.27;當(dāng)夫拉平度濃度為30μM時，P從基頂側(cè)(A)到基底側(cè)(B)為0.61×10-5cm·s-1，從B到A側(cè)為1.33×10-5cm·s-1，其PB-A/PA-B比值為2.17。P-gp抑制劑（環(huán)孢菌素A，維拉帕米）添加后，PB-A/PA-B比值從3.27分別降到1.12和1.35;細(xì)胞內(nèi)含夫拉平度的量也相應(yīng)增加。
　　 4.夫拉平度的大鼠腸吸收動力學(xué)研究
　　 采用UPLC法測定夫拉平度

10、循環(huán)灌流液在大鼠腸灌流模型中的腸動力學(xué)情況。收集的腸灌流液經(jīng)UPLC測定結(jié)果顯示，夫拉平度在腸道吸收較好，且無腸段差異。膽汁中夫拉平度代謝物的量隨時間增加。夫拉平度濃度40μM時，膽汁中檢測到的夫拉平度代謝物量（2.47～17.33nmoL）顯著高于低濃度10μM(1.60～2.84nmoL)。腸灌流液中只有在高濃度時才能檢測到極少量的夫拉平度代謝物(0.93～1.23nmoL)。
　　 5.夫拉平度在不同雌雄動物的肝微粒體中的

11、代謝研究
　　 采用UPLC法檢測夫拉平度在五種動物（小鼠、大鼠、豚鼠、狗、人）的肝微粒體酶中進(jìn)行葡萄糖醛酸化代謝反應(yīng)后的樣品，發(fā)現(xiàn)無論在哪種肝微粒體酶作用下，夫拉平度都會代謝并生成葡萄糖醛酸結(jié)合物。不同種屬的同一性別的動物的肝微粒體代謝夫拉平度的速率有顯著性差異（P＜0.05），而且在不同底物濃度下，五種肝微粒體的代謝速率快慢排列順序并不會保持一致，變化較大。而同種動物的不同性別的肝微粒體代謝夫拉平度的速率也存在著顯著性差異（

12、P＜0.05）。
　　 本研究旨在通過藥代動力學(xué)實(shí)驗(yàn)、Caco-2細(xì)胞模型和大鼠在體腸灌流模型研究夫拉平度腸道處置機(jī)制，另通過采用人和4種動物（小鼠、大鼠、豚鼠、狗）雌雄兩種性別的肝微粒體酶研究夫拉平度代謝種屬性別差異。藥代動力學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，夫拉平度生物利用度高(＞75％)，半衰期長（＞260分鐘），達(dá)峰時間短（＜20分鐘）。夫拉平度在Caco-2細(xì)胞模型上的雙向滲透系數(shù)為0.47×10-5cm·s-1～1.53×10-5cm

13、·s-1，夫拉平度濃度為10、30μM時，PB-A/PA-B比值分別為3.27和2.17。添加P-糖蛋白抑制劑環(huán)孢素A和維拉帕米后，Caco-2細(xì)胞內(nèi)含夫拉平度的量顯著增加，PB-A/PA-B比值也降低。大鼠在體腸灌流實(shí)驗(yàn)中，灌注10、40μM夫拉平度后，其在各腸道吸收良好，夫拉平度葡萄糖醛酸代謝產(chǎn)物在膽汁中的排泄量分別為(1.60～2.84nmol)和(12.47～17.33nmol)。夫拉平度在各種肝微粒體中都能被代謝并生成葡萄糖醛

14、酸結(jié)合物，同一性別的五種動物的肝微粒體代謝夫拉平度的速率有種屬差異(P＜0.05)，狗、豚鼠肝微粒體中夫拉平度的UGT代謝速率存在顯著性別差異(P＜0.05)，人、大鼠性別差異不顯著。
　　 綜上表明，夫拉平度具有較高的口服生物利用度，在腸道吸收好，P-gp可能參與了夫拉平度在Caco-2上的外排轉(zhuǎn)運(yùn)，膽道排泄是夫拉平度葡糖醛酸結(jié)合物首過消除的主要消除途徑之一，夫拉平度可能存在著肝腸循環(huán)，夫拉平度在肝微粒體中可發(fā)生葡萄糖醛酸結(jié)合