HSP27在胃癌轉移中的作用和機制研究.pdf

1、背景：
　　胃癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一,病理分期較早的患者可通過手術聯(lián)合化療取得較好的療效,病理分期晚的患者預后差,五年生存率低于10％,復發(fā)轉移是導致胃癌患者死亡的主要原因。因此,尋找胃癌轉移相關分子和預測預后有效的生物學標志分子一直是胃癌基礎和臨床研究的熱點。近年的研究發(fā)現(xiàn),熱休克蛋白家族參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展,與多藥耐藥、異常增殖、侵襲轉移等惡性生物學表型相關。HSP27作為HSPs亞家族小分子熱休克蛋白的成員之一,也

2、參與了多種惡性疾病的發(fā)生發(fā)展,它可以通過不同信號通路調控多種腫瘤的增殖、耐藥、轉移等惡性生物學表型。有文獻報道,HSP27在胃癌組織中表達水平升高,與患者預后情況呈負相關,但其具體機制尚不清楚,關于其與胃癌侵襲轉移的關系至今還鮮有文獻報道。本研究將以此為切入點展開研究,通過分析HSP27表達水平與胃癌細胞侵襲轉移能力之間的關系,探討以HSP27作為胃癌患者預后判斷標志分子和治療靶點的應用前景。
　　目的：
　　1.檢測 HS

3、P27在胃癌組織和細胞中的表達,分析其表達水平與臨床特征之間的關系。
　　2.研究HSP27對胃癌細胞體內(nèi)體外侵襲轉移能力的影響。
　　3.初步探討HSP27影響胃癌細胞侵襲轉移能力的機制。
　　方法：
　　1.檢測HSP27蛋白在胃癌組織及細胞中的表達
　　1)免疫組織化學染色檢測HSP27在胃癌組織中的表達和分布,分析HSP27在胃癌中的表達強度與臨床病例特征及預后的相關性。
　　2) Weste

4、rn blot檢測不同轉移潛能胃癌細胞系中HSP27蛋白的表達水平。
　　2.HSP27對胃癌細胞侵襲轉移能力的影響
　　1)利用Transwell實驗及細胞劃痕實驗,檢測下調HSP27表達后胃癌細胞體外侵襲轉移能力的變化。
　　2)利用裸鼠體內(nèi)尾靜脈注射轉移試驗,觀察不同HSP27表達水平的胃癌細胞體內(nèi)轉移能力的差異。
　　3.Western blot方法檢測下調HSP27表達的胃癌細胞中轉移相關分子的蛋白表達

5、改變。
　　結果：
　　1.在118例胃癌組織中,HSP27的陽性表達率為69%(71/118)。統(tǒng)計學分析患者臨床病理結果顯示,HSP27蛋白的表達水平與淋巴結受累和高級別病理學分期呈顯著正相關性,而與年齡、性別、分化程度(p>0.05)無統(tǒng)計學差異;并且HSP27表達越強,在隨訪的4年中胃癌患者生存率越低。
　　2.Western blot和qRT-PCR方法對不同轉移潛能胃癌細胞系的HSP27蛋白水平和mRNA水

6、平進行檢測,結果顯示:在轉移潛能較高的MKN28-M、9811-P、SGC7901-M細胞系中 HSP27表達水平高,而轉移潛能較低的胃癌細胞系MKN28-NM、9811、SGC7901-NM中HSP27表達則較低。
　　3.胃癌細胞系MKN28、BGC823細胞轉染慢病毒siRNA下調HSP27的表達,western blot和qRT-PCR結果證實,HSP27的表達水平明顯降低。
　　4.Transwell及細胞劃痕實驗

7、檢測發(fā)現(xiàn),與對照組細胞相比,HSP27表達下調的細胞MKN28-si、BGC823-si的體外侵襲轉移能力明顯減弱。
　　5.裸鼠尾靜脈注射轉移實驗結果顯示,與 NC對照組相比,HSP27表達下調的MKN28-si、BGC823-si細胞在祼鼠肺臟的轉移瘤發(fā)生率明顯降低。
　　6.Western blot結果顯示,HSP27表達下調的胃癌細胞MKN28-si、BGC823-si中,基質金屬蛋白酶分子MMP-9水平明顯降低,而

8、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2的表達水平無明顯改變。
　　結論:
　　1.HSP27表達水平與胃癌的侵襲轉移能力正相關,胃癌中HSP27蛋白表達水平越高,其出現(xiàn)淋巴結轉移受累和較高病理學分期的概率越大。HSP27表達水平與胃癌患者的生存率呈負相關,HSP27有望成為胃癌患者臨床預后判斷新的生物分子標志物。
　　2.降低胃癌 HSP27的表達水平,能夠抑制其體外、體內(nèi)的侵襲轉移能力。HSP27有可能成為抗胃癌轉移