MPS-1在胃癌細(xì)胞凋亡和轉(zhuǎn)移中作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：前期的研究結(jié)果顯示MPS-l(metallopanstimulin-1)在胃癌細(xì)胞和組織中高表達(dá)，下調(diào)MPS-1的表達(dá)能夠在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中抑制胃癌細(xì)胞的增殖，并且能夠誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞的自發(fā)性凋亡。此外，MPS-1下調(diào)能夠明顯抑制胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。因此，本實(shí)驗(yàn)擬解決如下關(guān)鍵問題：(1) MPS-1下調(diào)后胃癌細(xì)胞對(duì)凋亡誘導(dǎo)劑的敏感性如何變化？(2) MPS-1下調(diào)誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制是什么？(3)MPS-1在胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移中

2、的作用和相關(guān)的機(jī)制。
　　 方法：(1)用逆轉(zhuǎn)錄病毒干擾載體系統(tǒng)建立MPS-1穩(wěn)定下調(diào)的胃癌細(xì)胞株，凋亡誘導(dǎo)劑處理，并用TUNEL方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。(2)基因表達(dá)譜分析，差異表達(dá)基因的篩選，real-time PCR和Western blotting進(jìn)行驗(yàn)證。(3)生物信息學(xué)分析差異表達(dá)基因，對(duì)差異顯著性信號(hào)通路進(jìn)行篩選和驗(yàn)證。(4) RT-PCR、熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)、免疫熒光分析、凝膠遷移實(shí)驗(yàn)等檢測(cè)NF-kB的活性。(5)

3、構(gòu)建差異表達(dá)基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，篩選在胃癌細(xì)胞凋亡或轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用的基因并驗(yàn)證。(6)從MPS-1下調(diào)的胃癌細(xì)胞的形態(tài)、細(xì)胞骨架蛋白的改變、Transwell等實(shí)驗(yàn)觀察胃癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的變化。(7)免疫組織化學(xué)方法觀察MPS-1及相關(guān)蛋白在胃癌組織中的表達(dá)。
　　 結(jié)果：(1)得到了MPS-1穩(wěn)定下調(diào)的細(xì)胞株。不同濃度的凋亡誘導(dǎo)劑處理后發(fā)現(xiàn)MPS-1的下調(diào)能明顯增加胃癌細(xì)胞對(duì)凋亡誘導(dǎo)劑的敏感性而MPS-1的重新表達(dá)能夠逆轉(zhuǎn)

4、這種變化。(2) Gene Ontology(Go)對(duì)MPS-1下調(diào)后所得的差異表達(dá)基因分析得到凋亡相關(guān)的差異顯著性GO，凋亡促進(jìn)基因如CAD、Bid和Bax等表達(dá)上調(diào)，凋亡抑制基因如Bid、clAP2和Gadd45等表達(dá)下調(diào)。(3)下調(diào)MPS-1的表達(dá)后NF-kB信號(hào)通路顯著性改變，免疫熒光和凝膠遷移等實(shí)驗(yàn)顯示NF-kB活性降低。(4)基于GO和信號(hào)通路分析得到差異表達(dá)基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，篩選得到參與MPS-I下調(diào)誘導(dǎo)凋亡的相關(guān)基因Gad

5、d45B。(5) MPS--1下調(diào)細(xì)胞形態(tài)變小變圓，且貼壁能力降低，F(xiàn)-actin染色、劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell結(jié)果顯示下調(diào)MPS-1表達(dá)可抑制胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移。(6)基因表達(dá)譜及real-time結(jié)果提示整合素B4(ITGB4)在MPS-1下調(diào)的胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了關(guān)鍵的作用并在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)。(7)75對(duì)胃癌組織和相應(yīng)的癌旁組織的免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)胃癌組織中MPS-1和ITGB4共表達(dá)(P<0.001)。
　　 結(jié)論：