Dkk-1-Wnt-β-catenin信號途徑在肝癌細胞轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機制的研究.pdf

1、本文對Dkk-1/Wnt/β-catenin信號途徑在肝癌細胞轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機制進行了研究。主要內(nèi)容及結(jié)果過如下： ①將人肝癌細胞H7402接種聯(lián)合免疫缺陷(SCID)鼠，60天后在SCID鼠身體贏弱時，引頸處死，取SCID鼠臟器組織進行原代培養(yǎng)和傳代細胞培養(yǎng)，從肺組織中獲得一個H7402細胞的轉(zhuǎn)移亞克隆。腫瘤轉(zhuǎn)移相關基因表達譜芯片檢測結(jié)果表明，與H7402細胞相比，有11個轉(zhuǎn)移相關基因在M-117402細胞中上調(diào)表達，1

2、3個轉(zhuǎn)移相關基因在M-H7402細胞中下調(diào)表達。 ②在建立上述肝癌細胞轉(zhuǎn)移亞克隆的基礎上，比較了具有不同轉(zhuǎn)移能力的H7402細胞和M-H7402細胞中Wnt/β-catenin信號的差異。應用實時定量RT-PCR檢測還發(fā)現(xiàn)wnt途徑信號分子Wnt 1及受體Fz和Lrp 5 mRNA的表達水平在M-H7402細胞中上調(diào)。Westernblot分析結(jié)果顯示，與H7402細胞相比，M-H7402細胞中phospho-β-catenin

3、蛋白和Dkk-1蛋白表達下調(diào)，而β-catenin蛋白表達上調(diào)，提示M.H7402細胞中有B。catenin的積累，而H7402細胞中大部分的β-catenin已被降解。 ③應用基因轉(zhuǎn)染技術，將pcDNA3.1(-)一Dkk-1質(zhì)粒導入M-H7402細胞。實現(xiàn)Dkk-1基因瞬時過表達。經(jīng)Western blot檢測發(fā)現(xiàn)，M-H7402細胞中過表達Dkk-1可導致β-catenin的表達水平明顯下降，并促使c-Myc、cyclin