惡性黑素瘤中SOX4的表達(dá)及其對Wnt-β-catenin信號途徑作用的研究.pdf

1、第一部分 SOX4在人惡性黑素瘤組織中的表達(dá)
　　 目的：研究SOX4在人類惡性黑素瘤組織中的表達(dá)情況，探討SOX4與惡性黑素瘤之間可能存在的關(guān)系。
　　 方法：用免疫組化SP 法檢測30例惡性黑素瘤組織中的SOX4的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：在惡性黑素瘤組織中，腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)可見棕黃色至深褐色顆粒，胞漿也可著色。30例惡性黑素瘤組織中，有17例SOX4表達(dá)為陽性，陽性率為56.7％，而正常人皮膚組織中未見陽性

2、表達(dá)，兩組間SOX4表達(dá)陽性率具有顯著性差異。
　　 結(jié)論：在惡性黑素瘤組織中SOX4 出現(xiàn)異常的陽性表達(dá)，SOX4 可能與惡性黑素瘤的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。
　　 第二部分采用RNA 干擾技術(shù)抑制惡性黑素瘤細(xì)胞中SOX4的表達(dá)并研究其對Wnt/β-catenin 信號途徑活性的影響
　　 目的：研究惡性黑素瘤A375細(xì)胞中SOX4 對Wnt/β-catenin 信號途徑中Wnt3A及β-catenin的表達(dá)的影響以及對

3、Wnt/β-catenin 信號途徑活性的影響，探討惡性黑素瘤A375細(xì)胞中SOX4 對Wnt/β-catenin 信號途徑的調(diào)控作用及其可能的機(jī)制。
　　 方法：采用RNA 干擾技術(shù)，將兩段SOX4 siRNA 導(dǎo)入惡性黑素瘤A375細(xì)胞，使SOX4基因沉默，分別采用實(shí)時熒光定量PCR法和蛋白質(zhì)印跡法檢測干擾后Wnt/β-catenin 信號途徑中Wnt3A 及β-catenin的mRNA 及蛋白表達(dá)情況的變化，并采用TOPf

4、lash/FOPflash 雙質(zhì)粒報告基因系統(tǒng)檢測惡性黑素瘤A375細(xì)胞中Wnt/β-catenin 信號途徑活性隨RNA 干擾變化的情況。
　　 結(jié)果：本研究使用的兩段SOX4 siRNA 均成功轉(zhuǎn)染惡性黑素瘤A375細(xì)胞并有效抑制SOX4基因表達(dá)，發(fā)揮了對SOX4的基因沉默作用。轉(zhuǎn)染SOX4 siRNA 對Wnt3A的mRNA 及蛋白表達(dá)水平無顯著影響，對β-catenin的mRNA表達(dá)水平亦無顯著性影響，但使得細(xì)胞內(nèi)β-c

5、atenin蛋白量減少。同時，轉(zhuǎn)染了SOX4 siRNA的A375內(nèi)Wnt/β-catenin信號途徑活性較轉(zhuǎn)染非特異性siRNA的A375細(xì)胞及空白對照組為低，差異具有顯著性。
　　 結(jié)論：在惡性黑素瘤A375細(xì)胞中，SOX4 對Wnt/β-catenin 信號途徑具有正向調(diào)控作用，這種調(diào)控作用與β-catenin 有關(guān)。SOX4 上調(diào)A375細(xì)胞中β-catenin蛋白含量，其作用發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后水平，可能是SOX4 抑制β-c

6、atenin 降解的結(jié)果，也有可能與轉(zhuǎn)錄后調(diào)控或翻譯調(diào)控等有關(guān)。
　　 第三部分 SOX4 siRNA 對惡性黑素瘤細(xì)胞中Survivin的表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響
　　 目的：研究SOX4 對惡性黑素瘤A375細(xì)胞中Wnt/β-catenin 信號途徑的靶基因Survivin的基因表達(dá)的影響及對A375細(xì)胞增殖活力的影響。
　　 方法：分別用實(shí)時熒光定量PCR法和蛋白質(zhì)印跡法檢測RNA 干擾后A375細(xì)胞Survi

7、vin的mRNA 及蛋白表達(dá)水平的變化；用MTT 法檢測A375細(xì)胞的增殖活力。
　　 結(jié)果：
　　 （1）SOX4 siRNA 使得A375細(xì)胞Survivin的mRNA 及蛋白表達(dá)水平均顯著下降。
　　 （2）轉(zhuǎn)染了SOX4 siRNA的A375細(xì)胞增殖活力較對照組明顯下降。
　　 結(jié)論：SOX4 對惡性黑素瘤A375細(xì)胞的增殖具有促進(jìn)作用，其機(jī)制可能與SOX4增強(qiáng)Wnt/β-catenin 信號途徑