Sox9在大鼠骨關(guān)節(jié)炎軟骨中的表達(dá)及Wnt-β-catenin信號(hào)通路干預(yù)對(duì)其的影響.pdf

1、目的：
　　探討實(shí)驗(yàn)性大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型的有效性；探討軟骨細(xì)胞內(nèi)Sox9基因在骨關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）進(jìn)程中表達(dá)的特點(diǎn)，以及受Wnt/β-catenin信號(hào)通路（經(jīng)典Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路）干預(yù)后的影響。
　　方法：
　　105只SD大鼠隨機(jī)分為手術(shù)組（實(shí)驗(yàn)組）、阻斷Wnt/β-catenin信號(hào)通路組（干預(yù)組）和假手術(shù)組（對(duì)照組），每組各35只。
　?。?）實(shí)驗(yàn)性大鼠骨關(guān)節(jié)炎（OA）造模，手術(shù)組

2、（實(shí)驗(yàn)組）：前交叉韌帶橫斷和內(nèi)側(cè)半月板切除；對(duì)照組：打開關(guān)節(jié)腔，不切斷交叉韌帶和切除半月板；干預(yù)組：造模術(shù)后第二天始行降鈣素15 IU/kg隔日皮下注射,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組注射等量的生理鹽水。在造模1w、2w、4w、6w、8w、12w處死大鼠。膝關(guān)節(jié)標(biāo)本肉眼大體觀察，取股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨作為組織標(biāo)本，HE染色、甲苯胺藍(lán)染色。以 Mankin評(píng)分為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)OA的病程進(jìn)行分期。
　?。?）取股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨標(biāo)本。各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的標(biāo)本經(jīng)處理后，液氮保

3、存，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)Sox9、II型膠原、聚蛋白多糖（Aggrecan）的蛋白含量，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Sox9、II型膠原、聚蛋白多糖（Aggrecan）基因表達(dá)的變化，分析OA早、中、晚期上述細(xì)胞因子的變化特點(diǎn)。通過(guò)降鈣素（CT）阻斷Wnt/β-catenin通路后Sox9上調(diào)對(duì)各組大鼠標(biāo)本軟骨合成因子的影響，分析阻斷Wnt/β-catenin通路后Sox9的變化對(duì)骨關(guān)節(jié)炎軟骨的作用。
　　結(jié)果：
　　

4、（1）實(shí)驗(yàn)組：造模1w肉眼觀察沒(méi)有變化，組織切片HE染色見不規(guī)則裂隙，甲苯胺藍(lán)染色深染；2w關(guān)節(jié)軟骨失去光澤，色暗， HE染色軟骨細(xì)胞數(shù)量輕度增生，甲苯胺藍(lán)深染；4w見軟骨破壞，細(xì)胞數(shù)量增多；6w軟骨潰瘍破壞明顯，骨贅增生，軟骨層變薄，細(xì)胞排列紊亂，甲苯胺藍(lán)染色變淺；8w軟骨缺損，骨贅增生明顯，有軟骨細(xì)胞壞死，甲苯胺藍(lán)染色大部分層次明顯變淺；12w可見軟骨下骨外露，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，甲苯胺藍(lán)失染。干預(yù)組：病理改變時(shí)期延后2w。對(duì)照組大體

5、和組織切片接近正常。
　?。?）ELISA測(cè)定和Realtime PCR
　　Sox9:在實(shí)驗(yàn)組，Sox9含量在4w前上調(diào)，有差異（P<0.05）；在6-12w，仍表現(xiàn)為上調(diào)，但沒(méi)有差異（p>0.05）。在干預(yù)組，4w以前，Sox9上調(diào)趨勢(shì)明顯（P<0.05）；在6-12w，其表達(dá)仍表現(xiàn)為上調(diào)，但沒(méi)有差異（p>0.05）。
　　II型膠原和聚蛋白多糖（Aggrecan）：在實(shí)驗(yàn)組，該兩種蛋白表達(dá)呈下調(diào)趨勢(shì)，且差異顯著（

6、p<0.01）；在干預(yù)組，該兩種蛋白表達(dá)呈上調(diào)趨勢(shì)，有差異（p<0.05）。干預(yù)組和實(shí)驗(yàn)組相比，4w后呈上調(diào)趨勢(shì)（p<0.05）、其表達(dá)量在4w后也顯著增多（p<0.01）。
　　結(jié)論：
　?。?）通過(guò)本實(shí)驗(yàn)研究我們發(fā)現(xiàn)手術(shù)切斷前交叉韌帶及內(nèi)側(cè)半月板可以有效的制作大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型。而且手術(shù)創(chuàng)傷小，所需時(shí)間短，能反映骨關(guān)節(jié)炎由輕到重的整個(gè)病變過(guò)程。
　?。?）OA病程中，Sox9的表達(dá)呈上調(diào)趨勢(shì)，說(shuō)明軟骨細(xì)胞一直在對(duì)抗自