PPARγ途徑在NSAIDs影響胃癌細(xì)胞凋亡及增殖中的作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：通過培養(yǎng)人胃癌SGC-7901細(xì)胞和建立裸鼠胃癌移植瘤模型，分別在體內(nèi)和體外觀察過氧化物酶增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activatedreceptor γ，PPARγ)抑制劑干預(yù)后，非甾體抗炎藥(non-steroidal anti-inflammationdrugs，NSAIDs)對胃癌細(xì)胞凋亡和增殖影響的變化，探討PPART途徑在NSAIDs抗癌機(jī)制中的意義。 方法： 1

2、．體外培養(yǎng)人胃癌SGC-7901細(xì)胞，PPARγ抑制劑GW9662預(yù)先干預(yù)，半小時后分別加入舒林酸或尼美舒利繼續(xù)培養(yǎng)，同時設(shè)立不加藥、單用GW9662、單用舒林酸或尼美舒利對照組。MTT檢測藥物作用后各組細(xì)胞生長抑制率；FCM檢測細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的變化。 2．選擇健康雄性BALB/c裸小鼠，建立人胃癌SGC．7901移植瘤模型，腹腔注射GW9662+N(nimesulide，尼美舒利)，同時設(shè)立生理鹽水、GW9662、尼美舒利

3、三個對照組。用藥21天后，檢測并記錄移植瘤體積；腫瘤組織HE染色觀察腫瘤組織形態(tài)；免疫組化法分別檢測移植瘤PPARγ、p<'21Wafl>、p<'27Kipl>、Bcl-2、Bax、VEGF、NF-KB蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1．MTT對細(xì)胞增殖率的檢測：MTT檢測結(jié)果顯示，GW9662組較正常組無明顯變化；舒林酸、尼美舒利組呈時間依賴性抑制SGC-7901細(xì)胞增殖；GW9662+S(sulindac，舒林酸)組、GW96

4、62+N組結(jié)果表明，一定范圍內(nèi)GW9662呈劑量依賴性減弱舒林酸、尼美舒利抑制細(xì)胞增殖的作用，一定時間內(nèi)，GW9662對舒林酸或尼美舒利的抑制細(xì)胞增殖的作用逐漸增強(qiáng)，在24小時達(dá)高峰。 2．流式細(xì)胞術(shù)對腫瘤細(xì)胞凋亡的檢測：FCM結(jié)果可見，GW9662組較正常組無明顯變化；舒林酸、尼美舒利組SGC-7901細(xì)胞出現(xiàn)明顯凋亡，細(xì)胞阻滯在G<,0>/G<,1>期，S期和G<,2>/M期細(xì)胞比例減少；GW9662+S組、GW9662+N

5、組顯示，GW9662能減弱舒林酸、尼美舒利的促胃癌細(xì)胞凋亡的作用，改變細(xì)胞周期，GW9662+S或N作用于SGC.7901細(xì)胞，24h后細(xì)胞凋亡率較單用舒林酸、尼美舒利明顯降低，細(xì)胞在G<,0>/G<,1>期受阻滯的比例降低；S期和G<,2>/M期細(xì)胞比例升高。 3.裸鼠移植瘤體積：檢測用藥3周后各組裸鼠移植瘤的體積，應(yīng)用尼美舒利組裸鼠移植瘤體積較生理鹽水對照組明顯小，分別為2.50±1.08 mm<'3>和63.83±17.0

6、8 mm<'3>，而GW9662+N組為44.17±10.98mm<'3>，各組之間差異有顯著性(P<0.05)。 4.移植瘤組織HE染色：移植瘤組織HE染色：生理鹽水組、GW9662組細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)松散，可見核仁，顯示細(xì)胞增殖活躍，而尼美舒利組細(xì)胞核深染，很少見核仁，切片內(nèi)還可見到壞死的組織，GW9662+N組可見部分細(xì)胞核染色質(zhì)松散，部分細(xì)胞核深染，提示尼美舒利的抑制腫瘤的作用被GW9662部分減弱。 5.免疫組化法

7、檢測：裸鼠移植瘤組織PPAR3,、p<'21Wafl>、 p<'27Kipl>、Bcl-2、Bax、VEGF、NF-kB蛋白的表達(dá)：GW9662組較正常組無明顯變化；尼美舒利組較對照組移植瘤組織的PPARγ蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，同時p<,21Wafl>、p<,27Kipl>、Bax蛋白表達(dá)亦明顯增強(qiáng)，而Bcl-2、VEGF和NF-kB的表達(dá)減低；GW9662+N組小鼠與尼美舒利組相比，移植瘤組織的PPARγ蛋白表達(dá)減低，同時p<,21Waf