復(fù)方苦參在人γδT細(xì)胞對胃癌細(xì)胞殺傷作用中的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:探討復(fù)方苦參在人γδT細(xì)胞對胃癌細(xì)胞SGC-7901殺傷作用中的影響及其機(jī)制的研究。
　　 方法:
　　 一.體外異戊烯焦磷酸法（IPP）培養(yǎng)人γδT細(xì)胞，使用不同濃度的復(fù)方苦參誘導(dǎo)γδT細(xì)胞24小時(shí)，四甲基偶氮唑藍(lán)比色法（MTT）、流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測復(fù)方苦參作用前后人γδT細(xì)胞和SGC-7901的增殖、凋亡、及γδT細(xì)胞對NKG2D表達(dá)的變化，乳酸脫氫酶（LDH）法檢測人γδT細(xì)胞殺傷活性的變化。
　

2、　 二.MEK阻斷劑PD98059誘導(dǎo)γδT細(xì)胞一小時(shí)后，加入不同濃度的復(fù)方苦參共培養(yǎng)24小時(shí)，同時(shí)設(shè)對照組（不加PD98059誘導(dǎo)，即復(fù)方苦參和γδT細(xì)胞共培養(yǎng)24小時(shí)），MTT法檢測PD98059干預(yù)對復(fù)方苦參促進(jìn)γδT細(xì)胞增殖的影響，Western-Blot法檢測各組ERK1/2、p-ERK1/2表達(dá)的差異。
　　 結(jié)果:
　　 一 .MTT法檢測結(jié)果顯示
　　 1.不同濃度的復(fù)方苦參對γδT細(xì)胞生長的影

3、響與對照組比較、當(dāng)復(fù)方苦參濃度在1：12.5—1：25時(shí)，能夠抑制γδT細(xì)胞的增殖，濃度在1：50—1：800時(shí)γδT細(xì)胞的增值率與對照組比較能夠顯著促進(jìn)γδT細(xì)胞的增殖，且隨著復(fù)方苦參濃度的降低，γδT細(xì)胞的增殖率逐漸增強(qiáng)，于1：400時(shí)增殖率達(dá)峰值，當(dāng)濃度>1：800時(shí)，γδT細(xì)胞的增殖率逐漸降低。
　　 2.不同濃度的復(fù)方苦參對胃癌細(xì)胞SGC-7901生長的影響不同濃度的復(fù)方苦參作用SGC-7901后其抑制率與對照組比較有

4、顯著差異且隨著復(fù)方苦參濃度的降低，其抑制率逐漸降低，于1：800時(shí)其作用明顯減弱。
　　 3.PD98059干預(yù)對γδT細(xì)胞生長的影響在PD98059+復(fù)方苦參組與對照組比較，γδT細(xì)胞的生長抑制率均明顯增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而復(fù)方苦參組能夠明顯促進(jìn)γδT細(xì)胞的增殖。
　　 二 .LDH檢測結(jié)果顯示:復(fù)方苦參作用γδT細(xì)胞24小時(shí)后與對照組比較能夠明顯增強(qiáng)γδT細(xì)胞對胃癌細(xì)胞的殺傷活性（89.87±3.31vs67.35±

5、2.85），復(fù)方苦參濃度在1：50—1：400時(shí)，γδT細(xì)胞的殺傷活性隨著濃度的遞減而增強(qiáng)，在1：400時(shí)，γδT細(xì)胞對胃癌細(xì)胞株的殺傷活性最強(qiáng)，復(fù)方苦參作用SGC-7901與對照組比較，也能夠明顯增強(qiáng)γδT細(xì)胞對其的殺傷活性，但各濃度組之間無明顯差異。
　　 三. FCM檢測結(jié)果顯示
　　 1.不同濃度的復(fù)方苦參分別作用γδT細(xì)胞和胃癌細(xì)胞株24小時(shí)后，其在各個(gè)濃度，γδT細(xì)胞和SGC-7901的凋亡率與對照組比較均有

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)，且γδT細(xì)胞的凋亡率明顯低于胃癌細(xì)胞株的凋亡率（4.64％±0.23 vs 49.23±2.30，p<0.05）
　　 2復(fù)方苦參作用后的γδT細(xì)胞表達(dá)NKG2D的水平明顯高于對照組（78.32±2.83vs57.34±2.87）。
　　 四.Western-Blot法檢測結(jié)果顯示：復(fù)方苦參組與對照組、PD98059+復(fù)方苦參組比較，ERK1/2無明顯變化、p-ERK1/2表達(dá)明顯增多，有統(tǒng)計(jì)