β-欖香烯對人胃癌細(xì)胞的影響及其部分機(jī)制.pdf

1、胃癌是一種常見的惡性腫瘤，尤其在我國其發(fā)病率和死亡率位居全國第二[1]。胃癌臨床治療的模式以早期癌癥的手術(shù)切除為主。但大量的胃癌患者被確診時即進(jìn)入了進(jìn)展期。對于這些患者，通常采取全身化療、放療的方式治療，但存在著嚴(yán)重的不良反應(yīng)，且生存率低的問題。胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移是胃癌患者治愈率差主要原因。腫瘤轉(zhuǎn)移的過程十分復(fù)雜，主要包括腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)部位，逐步浸潤周邊組織以及進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)和淋巴循環(huán)系統(tǒng)，通過循環(huán)轉(zhuǎn)移到遠(yuǎn)處靶器官和組織，形成轉(zhuǎn)移灶。胃

2、癌的侵襲、轉(zhuǎn)移嚴(yán)重威脅著人類的健康，因此，探究抗胃癌的分子機(jī)制以及尋找天然的治療胃癌的有效藥物顯得尤為迫切。
　　欖香烯是從中醫(yī)草本姜黃屬莪術(shù)的根莖中分離出的化合物，作為化療輔助藥物廣泛用于各種實(shí)體腫瘤的治療。欖香烯抗腫瘤機(jī)制十分復(fù)雜，包括直接抑制殺傷腫瘤細(xì)胞、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡分化、抗腫瘤細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移等。β-欖香烯是欖香烯的主要活性成分，作為一種新型的抗腫瘤單體化合物也已顯現(xiàn)出其獨(dú)特優(yōu)勢。β-欖香烯可以調(diào)控多條信號通路，參與多種

3、激酶的磷酸化過程，如Ras/MARK/ERK和PI3K/Akt/m TOR通路。研究已證實(shí)了β-欖香烯能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和機(jī)體保護(hù)性自噬的抗腫瘤機(jī)制。但β-欖香烯治療癌癥的潛在機(jī)制尚不明確。近年研究認(rèn)為，賴氨酰氧化酶（lysyl oxidase,LOX）在惡性腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。而β-欖香烯對胃癌發(fā)揮的作用及其是否與細(xì)胞外基質(zhì)調(diào)節(jié)酶LOX相關(guān)聯(lián)，需進(jìn)一步探討。
　　目的：
　　1明確β-欖香烯對人胃

4、癌細(xì)胞的增殖、凋亡和周期的作用。
　　2明確β-欖香烯對人胃癌細(xì)胞的遷移、侵襲的作用。
　　3闡明β-欖香烯對胃癌細(xì)胞作用的部分機(jī)制。
　　方法：
　　1、體外培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞系BGC823和SGC7901，采用MTS法檢測β-欖香烯對人胃癌細(xì)胞系細(xì)胞生存率的影響。實(shí)驗(yàn)設(shè)置陰性對照組、紫杉醇陽性對照組和β-欖香烯組（50、100、200、300、400、600和800μmol/L）共9組。β-欖香烯處理BGC823

5、和SGC790124 h，MTS法的OD值反映β-欖香烯對人胃癌細(xì)胞系生長的抑制作用；Hoechst33342細(xì)胞染色法測定β-欖香烯對胃癌細(xì)胞系細(xì)胞凋亡的影響，流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度的β-欖香烯對人胃癌細(xì)胞系細(xì)胞凋亡和周期的影響；
　　2、細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測β-欖香烯（100、200、400μmol/L）對人胃癌細(xì)胞遷移作用的影響，Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測β-欖香烯（100、200、400μm

6、ol/L）對人胃癌細(xì)胞侵襲作用的影響；
　　3、β-欖香烯干預(yù)細(xì)胞后，酶標(biāo)儀法檢測β-欖香烯對LOX酶活性的影響，提取細(xì)胞內(nèi)總RNA的量，用實(shí)時熒光定量法定量分析LOX mRNA表達(dá)量變化，Western blot法檢測LOX蛋白表達(dá)的變化以及intergrinβ1、FAK、E-cadherin和N-cadherin蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1、β-欖香烯對人胃癌細(xì)胞系增殖和凋亡的影響
　　檢測β-欖香烯

7、處理人胃癌細(xì)胞系24 h后，光學(xué)顯微鏡下觀察。藥物干預(yù)組胃癌細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，細(xì)胞由原來的清亮逐漸皺縮，細(xì)胞間連接不緊密，并出現(xiàn)大量漂浮細(xì)胞。β-欖香烯干預(yù)胃癌細(xì)胞BGC823、SGC7901后，隨著β-欖香烯濃度的增加，人胃癌細(xì)胞的生存率逐漸下降。
　　Hoechst33342細(xì)胞染色法結(jié)果顯示，β-欖香烯處理人胃癌細(xì)胞后，與對照組相比，藍(lán)色團(tuán)塊碎裂，染色質(zhì)皺縮而發(fā)生高亮。且細(xì)胞數(shù)目也逐漸減少，出現(xiàn)不規(guī)格碎片。結(jié)果表明，β-欖香

8、烯能促進(jìn)人胃癌細(xì)胞發(fā)生凋亡。
　　流式細(xì)胞術(shù)分析表明，β-欖香烯處理胃癌細(xì)胞后。人胃癌細(xì)胞系BGC823凋亡率分別為6.67%、8.73%、9.65%、17.90%。人胃癌細(xì)胞系SGC7901凋亡率分別為8.1%、8.2%、18.7%、41.9%。與對照組相比，細(xì)胞凋亡率升高。
　　不同濃度β-欖香烯（100、200、400、800μmol/L）處理胃癌細(xì)胞后，BGC823和SGC7901細(xì)胞的S期細(xì)胞比例減少，G2/M期細(xì)

9、胞比例增加。
　　2、β-欖香烯對人胃癌細(xì)胞遷移、侵襲的影響
　　2.1β-欖香烯對胃癌細(xì)胞遷移的影響
　　劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，β-欖香烯處理胃癌細(xì)胞后，藥物組能夠顯著抑制劃痕距離（*p<0.05)。隨著藥物作用濃度的增加，劃痕區(qū)域內(nèi)BGC823和SGC7901細(xì)胞數(shù)減少，胃癌細(xì)胞遷移能力逐漸減弱。
　　Transwell遷移實(shí)驗(yàn)表明，β-欖香烯處理胃癌細(xì)胞后，藥物組能夠顯著抑制穿膜細(xì)胞數(shù)。
　　2.2β-欖

10、香烯對胃癌細(xì)胞侵襲的影響
　　Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)表明，β-欖香烯處理胃癌細(xì)胞后，藥物組能夠顯著抑制穿膜細(xì)胞數(shù)。
　　3、β-欖香烯對LOX酶活性、LOX mRNA以及LOX、integrinβ1、FAK、E-cadherin、N-cadherin蛋白的影響
　　SGC7901細(xì)胞經(jīng)過不同濃度β-欖香烯（100、200、400、800μmol/L）處理胃癌細(xì)胞24 h后，與對照組相比，LOX酶活性劑量依賴性降低，

11、LOX mRNA表達(dá)水平明顯下降（P<0.05）。
　　Western blot法檢測結(jié)果顯示，與對照組相比，LOX、integrinβ1、FAK、N-cadherin蛋白表達(dá)明顯下調(diào)，E-cadherin蛋白表達(dá)上調(diào)。
　　結(jié)論：
　　β-欖香烯能夠有效抑制人胃癌細(xì)胞系BGC823和SGC7901的增殖、遷移、侵襲，并誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生凋亡。β-欖香烯抑制胃癌的作用可能與降低LOX酶活性、降低LOX mRNA的表達(dá)、下