17β-雌二醇介導Hsp27在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及其分子機制的研究.pdf

1、目的：探討17β-雌二醇對甲狀腺乳頭狀癌細胞Hsp27表達的影響及分子機制。
　　方法：用10-8 mol/L的17β-雌二醇（E2）處理K1和BCPAP細胞不同時間，Real-time PCR檢測細胞中Hsp27 mRNA的表達，Western blot檢測細胞中Hsp27蛋白的表達；分別用E2、PPT（ERα激動劑）和DPN（ERβ激動劑）處理K1和BCPAP細胞，Western blot檢測細胞中Hsp27蛋白的表達；設計合

2、成ERαsiRNA、ERβsiRNA并轉(zhuǎn)染K1和BCPAP細胞，Western blot檢測細胞中ERα、ERβ和Hsp27蛋白的表達；ChIP檢測ERα、ERβ對Hsp27基因啟動子的影響；MTT檢測細胞存活率；酶標分析儀檢測caspase-3活性；免疫共沉淀檢測細胞中Hsp27與Procaspase-3的相互作用。
　　結(jié)果：用10-8 mol/L的E2處理K1和BCPAP細胞不同時間，隨著E2處理時間增加，K1和BCPAP細

3、胞中Hsp27的mRNA和蛋白表達水平逐漸增高，在24 h達到峰值（P＜0.05）。PPT促進Hsp27蛋白的表達（P＜0.05），DPN抑制Hsp27蛋白的表達（P＜0.05）。E2作用轉(zhuǎn)染ERαsiRNA的K1和BCPAP細胞24 h，與E2處理組相比，Hsp27蛋白的表達水平降低（P＜0.05）；E2作用轉(zhuǎn)染ERβsiRNA的K1和BCPAP細胞24 h，與E2處理組相比，Hsp27蛋白的表達水平升高（P＜0.05）。ChIP結(jié)果

4、顯示 ERα能夠與 Hsp27基因啟動子區(qū)域結(jié)合。MTT和caspase-3活性檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)E2通過ERα誘導Hsp27的上調(diào)，可以促進細胞的增殖，同時可以抵抗TNF-α引起的細胞凋亡（P＜0.05）。E2分別作用轉(zhuǎn)染ERαsiRNA和Hsp27 siRNA的K1和BCPAP細胞24 h，與E2處理組相比，Hsp27與Procaspase-3的相互作用均減弱。
　　結(jié)論：17β-雌二醇可以通過ERα促進K1和BCPAP細胞中Hsp