BMP2和BMP7基因共轉(zhuǎn)染BMSC-PRP凝膠組織工程材料的構(gòu)建及體內(nèi)外實驗研究.pdf

1、研究目的：
　　 本課題擬制作并證明BMP2、BMP7基因共轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞/自體PRP凝膠復合組織工程骨在體內(nèi)有良好的成骨能力和生物安全性，可以達到植骨融合材料的要求。建立可替代自體骨和其他骨移植替代物的組織工程骨。
　　 研究方法：
　　 將兩月齡的新西蘭兔36只隨機分為4組，每組9只。第一組為單純植入PRP凝膠組；第二組為植入轉(zhuǎn)染BMP2的BMSCs/PRP凝膠組織工程骨組；第三組為植入轉(zhuǎn)染BMP7的B

2、MSCs/PRP組織工程骨組；第四組為植入共轉(zhuǎn)染BMP2，7的BMSCs/PRP凝膠組織工程骨組。
　　 獲取、分離、培養(yǎng)、擴增兔骨髓間充質(zhì)干細胞BMSCs并檢測，第三代細胞保存并選取為待轉(zhuǎn)染細胞。以pAd/CMV/V5-Dest為載體構(gòu)建BMP2和BMP7腺病毒，將兩種基因按照分組分別轉(zhuǎn)染第三代兔BMSCs。
　　 從每只兔子的耳中央靜脈抽取5ml全血，采用Lendersberg法制備得到PRP，并于-20℃保存。

3、r>　　 將BMP2和BMP7共轉(zhuǎn)染的BMSCs和PRP混合后激活，制備得到BMP2、BMP7基因共轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞/自體富血小板凝膠支架組織工程骨，部分培養(yǎng)7天后對該組織工程骨進行電鏡掃描觀察其組織學和形態(tài)學。
　　 制備新西蘭兔脛骨缺損模型，在脛骨平臺下方約2cm處用鉆頭磨出大小約為3mm×5mm×7mm大小的單皮質(zhì)骨缺損槽，按照分組分別植入材料，絲線間斷縫合傷口后將動物分籠飼養(yǎng)。16周處死動物，觀察組織工程骨的表面變

4、化、骨癡形成、骨缺損修復情況及周圍組織反應。進行X線和CT檢查，觀察各組骨愈合情況，行組織學染色觀察及電鏡觀察等。
　　 研究結(jié)果：
　　 BMP2、BMP7基因共轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞/自體富血小板凝膠支架組織工程骨在體外能良好表達相關(guān)基因和蛋白，植入兔體內(nèi)后無免疫源性，具有良好的成骨作用。其在體內(nèi)能穩(wěn)定的表達BMP2與BMP7，較未轉(zhuǎn)染BMP2與BMP7組有更好的骨誘導性能，且其較單基因轉(zhuǎn)染組有更好的成骨活性，可成為替

5、代自體骨和其他骨移植替代物的組織工程材料。
　　 研究結(jié)論：
　　 1、以全骨髓貼壁法可以分離得到具備多向分化潛能的兔BMSCs；
　　 2、以pAd/CMV/V5-Dest為載體構(gòu)建的BMP2腺病毒和BMP7腺病毒能夠共轉(zhuǎn)染兔BMSCs，并共同表達BMP2和BMP7；
　　 3、以Lendersberg法可以制備得到PRP，和BMP2、BMP7基因共轉(zhuǎn)染BMSCs有很好的組織相容性；
　　 4、