牙鲆變態(tài)期間骨骼發(fā)育和其相關(guān)基因Sox9，Bmp4和Bmp2的表達(dá)分析.pdf

1、牙鲆是我國重要的經(jīng)濟(jì)魚種之一，它胚后有一個(gè)特殊的變態(tài)發(fā)育過程，在這期間形態(tài)和生活習(xí)性上都有一個(gè)極大的轉(zhuǎn)變，死亡率較高，因此研究牙鲆變態(tài)發(fā)育以降低其死亡率可以直接提高牙鲆的產(chǎn)量。牙鲆變態(tài)發(fā)育中骨骼形態(tài)發(fā)生了巨大的改變，骨骼發(fā)育過程中有明顯的增生、消融和遷移的現(xiàn)象，但在這方面的研究目前還較少。 本研究采用骨骼三重染色的方法對(duì)牙鲆仔魚從變態(tài)發(fā)育前至變態(tài)發(fā)育結(jié)束的五個(gè)時(shí)期的仔魚進(jìn)行整體染色，以期對(duì)牙鲆變態(tài)發(fā)育期間其骨骼發(fā)育情況進(jìn)行系統(tǒng)分

2、析。利用不同的顏色清晰地標(biāo)識(shí)出牙鲆變態(tài)發(fā)育期間軟骨和硬骨的分化、遷移和生長的過程以及牙鲆右眼移位中神經(jīng)的遷移方向以及變態(tài)發(fā)育后神經(jīng)的分布情況。結(jié)果表明，牙鲆變態(tài)前期仔魚軟骨比例較高，隨著發(fā)育的進(jìn)行，軟骨明顯發(fā)生遷移和體積縮小，與此同時(shí)，硬骨則逐漸發(fā)育成熟。 此外，為進(jìn)一步研究骨骼發(fā)育分化的機(jī)理，本研究克隆了牙鲆Bmp4、Sox9和Bmp2基因，并對(duì)其在變態(tài)發(fā)育過程不同時(shí)期仔魚和成魚不同組織的表達(dá)進(jìn)行了半定量研究，以探索這些基因的

3、時(shí)空表達(dá)特征。對(duì)不同時(shí)期仔魚的半定量RT-PCR結(jié)果表明，未檢測到Bmp2基因在胚胎和仔魚階段的表達(dá)；Bmp4在仔魚階段有少量表達(dá)且總體上隨著牙鲆的變態(tài)發(fā)育其表達(dá)量呈遞減趨勢；Sox9在仔魚階段表達(dá)量較高，在出膜后仔魚中表達(dá)量先升高，后隨著變態(tài)發(fā)育的發(fā)生，軟骨分化結(jié)束表達(dá)量遞減。通過熒光定量的結(jié)果分析，Bmp4和Sox9在仔魚階段的前三個(gè)時(shí)期以約15％的量遞減，在變態(tài)Ⅳ期也就是牙鲆右眼移至頭頂、形態(tài)發(fā)生巨大轉(zhuǎn)變的變態(tài)高峰期表達(dá)量有顯著降