鯉魚中Sox9基因的克隆及成體組織表達(dá).pdf

1、本實(shí)驗(yàn)首先根據(jù)公開發(fā)表的Sox9基因HMG保守盒區(qū)序列資料，設(shè)計(jì)了一對兼并性很高的引物，采用不規(guī)則跳躍降落PCR法對鯉魚的基因組DNA進(jìn)行了擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)至少存在三種形式的Sox9基因。三者在保守盒區(qū)編碼的氨基酸序列同源性非常高，并存在一個內(nèi)含子，但是內(nèi)含子序列差異很大，分別為704bp、616bp和176bp。同時，設(shè)計(jì)特異引物對鯉魚腦組織中三種形式的Sox9基因進(jìn)行了RT-PCR擴(kuò)增，證實(shí)了三者內(nèi)含子的剪接位點(diǎn)。在這些研究的基礎(chǔ)之上采用

2、RACE技術(shù)分別克隆了鯉魚Sox9b基因的5′端和3′端，通過拼接獲得了全長cDNA序列。包括poly(A)在內(nèi)Sox9b基因的cDNA全長2447bp，其中5′端非翻譯區(qū)長233bp，3′端非翻譯區(qū)長927bp，開讀框長1287bp，編碼428個氨基酸，其中96-174位共79個氨基酸為HMG保守盒。該基因的Genebank注冊號為AY956415。將鯉魚Sox9b基因與三刺魚等九種動物的氨基酸序列相比較發(fā)現(xiàn)，它們的同源性高達(dá)75％，