SOX9與Ⅱ型膠原在小鼠MSCs三系分化中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過(guò)成骨、成軟骨、成脂肪誘導(dǎo)干細(xì)胞分化，分析三種分化過(guò)程以及不同時(shí)期的SOX9與Ⅱ型膠原mRNA含量的變化，探討SOX9在不同時(shí)空分布的表達(dá)規(guī)律及與Ⅱ型膠原的相關(guān)關(guān)系。
　　方法：取4周齡昆明小鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞，體外培養(yǎng)得到MSCs并傳達(dá)至第3代，對(duì)所獲取的細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表型確定為干細(xì)胞，通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞周期檢測(cè)確定細(xì)胞增殖能力屬于正常范圍確定細(xì)胞數(shù)量，共分三組每組設(shè)三個(gè)時(shí)間段，不進(jìn)行誘導(dǎo)的細(xì)胞作為

2、對(duì)照組。通過(guò)成骨、成軟骨、成脂肪三種誘導(dǎo)培養(yǎng)液對(duì)三組細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)，分別在3天、7天、14天后收集提取細(xì)胞的總RNA，通過(guò)RT-PCR進(jìn)行SOX9與Ⅱ型膠原的mRNA定量檢測(cè)，同時(shí)對(duì)誘導(dǎo)后的細(xì)胞進(jìn)行染色、免疫熒光染色，觀察其分化狀態(tài)及相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：第三代BMSCs生長(zhǎng)良好，流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表型證實(shí)為干細(xì)胞，對(duì)誘導(dǎo)后細(xì)胞進(jìn)行染色、免疫熒光染色結(jié)果證實(shí)細(xì)胞分化為骨、軟骨、脂肪細(xì)胞；經(jīng)RT-PCR檢測(cè)，在三組誘導(dǎo)分化細(xì)胞中S

3、OX9mRNA含量由高到低分別是成軟骨、成骨、成脂肪，Ⅱ型膠原mRNA含量由高到低分別是成軟骨、成脂肪、成骨。在成軟骨分化中SOX9在3天、7天是不斷升高的，14天呈下降趨勢(shì)。Ⅱ型膠原在3天、7天、14天都是逐漸升高的。在成骨分化中SOX9mRNA含量隨著時(shí)間推移而增加，而Ⅱ型膠原則隨著時(shí)間推移而不斷降低，兩組及各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)含量相比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在成脂肪分化中SOX9mRNA表達(dá)與對(duì)照組比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.0