小鼠ES細胞的定向誘導分化與建系實驗研究.pdf

1、近年來,胚胎干細胞(ES cells)以其具有全能性、可操作性和可塑性等諸多優(yōu)點,已經(jīng)成為醫(yī)學和生命科學領(lǐng)域研究的熱點之一.研究者們試圖用ES細胞建立糖尿病、老年型癡呆、帕金森氏癥等遺傳疾病轉(zhuǎn)基因動物模型.在這些研究中,最關(guān)鍵的是ES細胞的來源和定向誘導分化問題.進行一系列研究必須要有足夠的ES細胞,特別是建立轉(zhuǎn)基因動物模型,需要10代以內(nèi)的ES細胞;而用作細胞治療研究也必須解決其他分化細胞的影響問題.在我們的實驗中,以小鼠ES-D3細

2、胞系為對象,通過細胞培養(yǎng)大量增殖未分化細胞,再用兩種方法進行ES細胞向神經(jīng)細胞的誘導分化實驗.首先從胚體(EBs)本身探討ES細胞內(nèi)部調(diào)控誘導分化的機制,用懸浮培養(yǎng)、懸滴培養(yǎng)、懸浮轉(zhuǎn)懸滴培養(yǎng)的方法培養(yǎng)出不同時間的EBs,再加以RA處理,觀察比較EBs對ES細胞神經(jīng)分化的影響;在此基礎(chǔ)上,用不同濃度的RA處理EBs,分析誘導劑RA對ES細胞神經(jīng)分化的影響.結(jié)果表明,用10<'-6>M的RA處理懸滴培養(yǎng)3d轉(zhuǎn)懸浮培養(yǎng)1d的EBs 4d,能得

3、到較高的神經(jīng)分化比例.同時,為以后開展轉(zhuǎn)基因動物模型的研究,我們還進行了小鼠ES細胞建系的部分工作.以ICR小鼠和昆明小鼠為實驗對象,采用超數(shù)排卵的方法獲得小鼠胚胎,培養(yǎng)在用絲裂霉素C處理過的ICR小鼠和昆明小鼠MEF細胞飼養(yǎng)層上,選取適當時間離散增殖的ICM和類ES細胞集落,分析了在小鼠ES細胞建系過程中,飼養(yǎng)層細胞、消化液及不同品系來源的胚胎的影響.從實驗結(jié)果來看,ICR小鼠和昆明小鼠兩種來源的飼養(yǎng)層細胞對胚胎貼壁、ICM增殖無影響