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文檔簡介
1、骨髓間充質干細胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)起源于中胚層,主要存在于成年哺乳動物的骨髓中,與造血干細胞(Hemopoietic stem cells,HSCs)共存。MSCs不僅參與構建造血微環(huán)境,發(fā)揮支持造血的作用,而且研究表明其易于體外分離培養(yǎng)和擴增、可自體移植并具有跨胚層分化為多種細胞表型的能力,例如可以分化為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、肌腱細胞、成肌細胞和神經細胞等多種細胞,未分化的或經遺傳修飾過
2、的MSCs有望成為未來細胞/基因治療、組織工程的理想種子細胞。 本研究目的在于闡明小鼠骨髓MSCs的生物學性能及其分化潛能,優(yōu)化小鼠MSCs的增殖培養(yǎng)條件,以便未來利用該類細胞作為疾病細胞/基因治療的模型。 為此,本試驗利用成年昆明小鼠為對象,較為系統(tǒng)全面地研究了其MSCs的分離、培養(yǎng)、擴增、形態(tài)學、生長特性、以及體外誘導分化能力,為進一步深入研究MSCs的誘導分化和應用打下實驗基礎。結果如下: 1.本試驗應用貼
3、壁分離法成功分離得到昆明小鼠股骨和脛骨MSCs,體外培養(yǎng)到第8代,細胞數(shù)量擴增了5000倍以上。本試驗所分離的昆明小鼠MSCs具有該類細胞的典型特征:外形呈多角形、三角形或長梭形,細胞核質比大、胞漿中細胞器少、核仁明顯,具有快速增殖的能力,類似于人和其它動物的MSCs,細胞形態(tài)均一,排列有序,體外培養(yǎng)8代以上無變化。 2.小鼠MSCs可以在體外用馬血清或地塞米松、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤、胰島素、吲哚美辛定向誘導分化為脂肪細胞
4、,細胞內有脂滴出現(xiàn),隨著時間延長,脂滴逐漸增加并融合為脂泡,細胞由梭形轉變?yōu)閳A形或多角形,油紅O染色呈陽性,從而建立了MSCs分化為脂肪細胞的模型,有助于研究肥胖發(fā)生的機制。同時,這也是和骨髓造血干細胞的區(qū)別之一。 3.本試驗成功誘導小鼠MSCs體外分化為成骨細胞表型,產生Von Kossa染色陽性的礦化結節(jié)。試驗證明,地塞米松、β-甘油磷酸鈉、抗壞血酸是誘導MSCs向成骨分化的重要因素,MSCs可以作為骨組織工程重要的種子細胞
5、來源。 4.本試驗分離獲得了小鼠腦神經細胞,細胞形態(tài)典型,并成功用于MSCs成神經誘導后的免疫熒光細胞化學鑒定的陽性對照。該分離培養(yǎng)方法簡單,可以滿足一般實驗的需要。 5.本試驗結果表明,小鼠MSCs在β-巰基乙醇和全反式維甲酸誘導下分化為神經樣細胞,呈現(xiàn)神經細胞的基本形態(tài)結構,表達神經細胞的分子標記NSE和NF-200,誘導產生的神經細胞在神經培養(yǎng)基中培養(yǎng)可以存活,但這種分化細胞是否具有神經細胞的功能有待于進一步研究。
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