禽傳染性支氣管炎DNA疫苗脂質(zhì)體、殼聚糖復合物的制備及免疫效果研究.pdf

1、本文對禽傳染性支氣管炎(IB)DNA疫苗脂質(zhì)體、殼聚糖復合物的制備工藝進行了研究，制備了IB的脂質(zhì)體/DNA、殼聚糖/DNA及脂質(zhì)體/(pDNAIL-2+DNA)復合物(pDNAIL-2為雞白介素-2真核質(zhì)粒)三種DNA疫苗，免疫7日齡健康雛雞，以裸IBDNA疫苗為對照，采用流式細胞儀(FACS)和間接ELISA試驗分別對宿主外周血T淋巴細胞亞類CD4+、CD8+和特異性抗IBV血清IgG的動態(tài)變化進行檢測，并在免疫后35天以IBV強毒

2、株進行攻毒保護實驗。 IBDNA疫苗復合物制備工藝研究試驗結果表明，在卵磷脂與膽固醇摩爾比為5∶4、1ml乳化水脂質(zhì)用量40mg、陽性材料SA占卵磷脂的摩爾數(shù)為1/5、有機相與無機相體積比為2∶1時采用逆向蒸發(fā)法制備可得到形態(tài)規(guī)則、包封率高的脂質(zhì)體/DNA復合物混懸液，且脂質(zhì)體與質(zhì)粒DNA的結合比為20∶1；殼聚糖DNA疫苗復合物的制備工藝為：0.4％殼聚糖溶液與質(zhì)粒DNA以10∶1質(zhì)量比采用復凝集法混合。 以不同免疫佐

3、劑的IBDNA疫苗經(jīng)肌肉注射(I.M)免疫健康雛雞，檢測免疫雞外周血中CD4+、CD8+T淋巴細胞數(shù)及血清中特異性抗IBV血清IgG動態(tài)變化。結果表明：CD4+、CD8+T淋巴細胞數(shù)量，除pDNAIL-2/DNA疫苗組僅略高于對照組外，其他試驗組均與DNA疫苗對照組有差異(P＜0.01或P＜0.05)；在誘導特異性IBV血清抗體方面，試驗組的IgG水平高于對照組，但僅脂質(zhì)體/(pDNAIL-2+DNA)疫苗組在10d時與對照組差異顯著。

4、各試驗組間，脂質(zhì)體/pDNAIL-2+DNA疫苗組的CD4+T淋巴細胞數(shù)量高于pDNAIL-2/DNA疫苗(P＜0.01)和殼聚糖/DNA疫苗組(P＜0.05)，及脂質(zhì)體/DNA疫苗組高于pDNAIL-2/DNA疫苗組(P＜0.05)；脂質(zhì)體/pDNAIL-2+DNA疫苗誘導的特異性IgG在10d時高于pDNAIL-2/DNA疫苗組(P＜0.05)，其它情況下組間均無顯著差異。攻毒保護試驗結果表明，對強毒的抵抗力脂質(zhì)體/pDNAIL-2

5、+DNA疫苗=脂質(zhì)體/DNA疫苗＞pDNAIL-2/DNA疫苗=殼聚糖/DNA疫苗＞裸DNA疫苗，表明佐劑不僅能增強DNA疫苗誘導細胞和體液免疫應答的能力，特別是細胞免疫反應，而且它們所介導的免疫反應對保護宿主抵抗強毒的攻擊中，脂質(zhì)體的作用強于殼聚糖。 以脂質(zhì)體/DNA和殼聚糖/DNA疫苗經(jīng)滴鼻或眼途徑(I.N)免疫雛雞后的細胞免疫反應檢測結果表明，殼聚糖介導DNA疫苗刺激機體產(chǎn)生的CD4+T淋巴細胞數(shù)在免疫10d后高于脂質(zhì)體/

6、DNA疫苗組，但二者僅在第15d有顯著差異；脂質(zhì)體/DNA疫苗組的CD8+T淋巴細胞數(shù)在免疫后5d即達到最大值，而殼聚糖/DNA疫苗組則在第15d，且二者間無顯著差異；殼聚糖/DNA疫苗誘導的特異性IBV血清抗體IgG水平僅略高于脂質(zhì)體/DNA疫苗組；而對強毒的抵抗力脂質(zhì)體/DNA疫苗大于殼聚糖/DNA疫苗。由此表明，DNA疫苗經(jīng)粘膜免疫途徑也能刺激機體產(chǎn)生較強的細胞和體液免疫反應，且脂質(zhì)體介導的DNA疫苗的免疫保護作用比殼聚糖強。