甲鈷胺營養(yǎng)神經(jīng)治療對糖尿病周圍神經(jīng)病變小鼠的心肌保護(hù)作用及其機(jī)制探討.pdf

1、第一分:甲鈷胺營養(yǎng)神經(jīng)治療對糖尿病周圍神經(jīng)病變小鼠離體心臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制
　　 研究背景：糖尿病被公認(rèn)為冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的等危癥，是冠心病的主要危險因素。周圍神經(jīng)病變是糖尿病最常見的慢性并發(fā)癥之一，可以導(dǎo)致感覺神經(jīng)末梢受損。瞬時受體點位香草酸亞型1(TRPV1)是一種非選擇性的離子通道，廣泛分布于包括感覺神經(jīng)末捎在內(nèi)的神經(jīng)系統(tǒng)中，激活后可促使感覺神經(jīng)末梢釋放神經(jīng)遞質(zhì)，如降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)和P物

2、質(zhì)(SP)等，從而引起血管擴(kuò)張、心率增快等效應(yīng)。TRPV1是心肌缺血重要的傷害感受器，心肌近外膜處有大量TRPV1分布，在糖尿病小鼠心臟中其表達(dá)量顯著降低。甲鈷胺是臨床常用的治療末梢性神經(jīng)障礙的藥物，而它對于心血管系統(tǒng)的影響尚未被深入研究。
　　 目的：本部分研究的目的是為了明確甲鈷胺營養(yǎng)神經(jīng)治療在糖尿病周圍神經(jīng)病變小鼠離體心臟缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用及其對心肌TRPV1表達(dá)的影響，并進(jìn)一步探討內(nèi)在的作用機(jī)制。
　　

3、方法：雄性ICR小鼠腹腔注射連脲霉素建立糖尿病模型8周后，以甲鈷胺(1mg/kg/day，I．M．)營養(yǎng)神經(jīng)治療4周。神經(jīng)電生理方法測定感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度(SNCV)，熱板試驗測定痛閾值。采用Langendorff離體心臟缺血/再灌注模型測定心功能指標(biāo)，檢測再灌注后冠脈流出液中乳酸脫氫酶(LDH)、CGRP和SP的含量，蛋白印跡試驗檢測心肌TRPV1、CGRP受體(CRLR)和SP受體(SPR)的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：糖尿病小鼠

4、的SNCV顯著慢于正常對照組小鼠，疼痛閾值也明顯增高；經(jīng)甲鈷胺治療的糖尿病小鼠SNCV快于未治療組，疼痛閾值也低于未治療組。與正常對照組相比，糖尿病小鼠心臟在缺血/再灌注過程中受到更為嚴(yán)重的心肌損傷，左室舒張末壓(LVEDP)顯著增高，左室發(fā)展壓(LVDP)明顯降低，冠脈流量(CF)顯著減少，LDH釋放增加；經(jīng)甲鈷胺治療的糖尿病小鼠心臟，在缺血/再灌注中的損傷較未治療組輕，表現(xiàn)為較低的LVEDP、較高的INDP、較大的CF以及較少的LD

5、H釋放量。糖尿病小鼠心臟冠脈流出液的CGRP、SP含量以及心肌TRPV1、CRLR、SPR表達(dá)量均明顯低于正常對照組；治療組糖尿病小鼠心臟冠脈流出液的SP含量以及心肌TRPV1、SPR表達(dá)量均高于未治療組。
　　 結(jié)論：甲鈷胺營養(yǎng)神經(jīng)治療在糖尿病周圍神經(jīng)病變小鼠離體心臟缺血再灌注過程中具有心肌保護(hù)作用。該效應(yīng)可能與糖尿病小鼠心臟中TRPV1和SPR表達(dá)與激活的部分恢復(fù)相關(guān)。
　　 第二部分:甲鈷胺營養(yǎng)神經(jīng)治療對糖尿病周圍

6、神經(jīng)病變小鼠急性心肌梗死后心功能的影響及其機(jī)制探討
　　 研究背景：心肌梗死是糖尿病患者的主要死亡原因之一，而在多數(shù)情況下并不伴有典型的胸痛表現(xiàn)，即靜息性心肌梗死。糖尿病周圍神經(jīng)病變(DPN)是糖尿病最常見的并發(fā)癥之一，DPN導(dǎo)致的感覺神經(jīng)功能障礙可能與糖尿病患者易發(fā)生靜息性心肌缺血有關(guān)，對心肌缺血的痛覺感知障礙使糖尿病患者發(fā)生心源性猝死的風(fēng)險顯著增加。在第一部分的離體研究中，我們發(fā)現(xiàn)甲鈷胺營養(yǎng)神經(jīng)治療增加了TRPV1和SPR在

7、心肌中的表達(dá)，使得缺血導(dǎo)致的TRPV1激活上調(diào)，SP釋放增加，從而在DPN小鼠心臟缺血再灌注損傷中發(fā)揮心肌保護(hù)作用。在體實驗中，甲鉆胺營養(yǎng)神經(jīng)治療是否也有類似的心肌保護(hù)作用，我們將在本部分的研究中進(jìn)一步闡明。
　　 目的：本部分研究的目的是為了明確甲鈷胺營養(yǎng)神經(jīng)治療對糖尿病周圍神經(jīng)病變小鼠心肌梗死后心功能及梗死面積的影響，通過在體實驗觀察感覺神經(jīng)調(diào)節(jié)在保護(hù)心肌缺血性損傷中的作用，嘗試從一個全新的角度探索預(yù)防心肌缺血性損傷的新方法

8、。
　　 方法：雄性ICR小鼠腹腔注射連脲霉素建立糖尿病模型8周后，以甲鈷胺(1mg/kg/day，I．M．)營養(yǎng)神經(jīng)治療4周。神經(jīng)電生理方法測定感覺神經(jīng)傳導(dǎo)速度(SNCV)，熱板試驗測定痛閾值。采用冠狀動脈左前降支結(jié)扎建立小鼠心肌梗死模型，超聲心動圖測定心梗后2天各組小鼠心臟結(jié)構(gòu)改變和心功能指標(biāo)，伊文思藍(lán)—TTC雙染色法測定心肌梗死面積，測定血漿LDH、CGRP和SP的含量。
　　 結(jié)果：糖尿病小鼠的SNCV顯著慢于正

9、常對照組小鼠，疼痛閾值也明顯增高；經(jīng)甲鈷胺治療的糖尿病小鼠SNCV快于未治療組，疼痛閾值也低于未治療組。與正常對照組相比，糖尿病小鼠心臟在心肌梗死過程中受到更為嚴(yán)重的心肌損傷，心肌梗死面積增大，血漿LDH含量增加，心功能損程度更為嚴(yán)重，左室收縮末期內(nèi)徑(LVESD)顯著增大，左心室短軸縮短率(Fs)及射血分?jǐn)?shù)(EF)明顯降低；經(jīng)甲鈷胺治療的糖尿病小鼠心臟，在心肌梗死中的損傷較未治療組輕，心肌梗死面積較小，血漿LDH含量較低，心功能損程度