河南省結核分枝桿菌基因分型與耐藥性和地區(qū)分布關系的研究.pdf

1、背景與目的：
　　 結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)是影響人類健康的主要病原體之一，北京家族(Beijing family)是造成我國結核病傳播的主要基因型。特別是耐多藥北京家族基因型結核分枝桿菌菌株引起的暴發(fā)流行在歷史上曾多次發(fā)生，所以北京型菌株與耐藥之間的相關性成為了研究熱點。隨著分子生物學技術的發(fā)展，建立了一些有效的分子分型方法，并應用于結核病的分子流行病學監(jiān)測，將有助于準確識別

2、結核病的爆發(fā)、流行以及制定有效的防控措施。
　　 Spoligotyping技術近年來成為進一步檢測結核分枝桿菌復合群并對其分型的首選方法。該方法的基本原理是基于直接重復區(qū)（DR區(qū)）的多態(tài)性。DR區(qū)只出現(xiàn)于結核分枝桿菌復合群中，由若干個保守的長為36bp的直接重復序列組成，并被非重復序列即間隔區(qū)分開。每個間隔區(qū)序列長為34-41bp.Spoligotyping通過擴增這些間隔區(qū)，將帶有標記的擴增產物與膜上結合的43個寡核苷酸雜交

3、，再通過增強化學發(fā)光法進行檢測即可得到較為特異的結果。通常間隔區(qū)的順序在所有菌株都是相同的，但可能會發(fā)生某一間隔區(qū)的插入或缺失，因此利用Spoligotyping就可以對結核分枝桿菌進行株水平的鑒定。
　　 應用該技術研究河南地區(qū)結核分枝桿菌的基因型分布特征及北京家族在河南的流行情況、不同基因型的年齡分布特征以及不同地域的基因型分布特征。探討其在今后結核病控制中的應用價值。
　　 材料和方法：
　　 應用WHO推

4、薦的比例法對344株菌進行異煙肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、鏈霉素(SM)4種藥的藥敏試驗。應用spoligotyping分型技術對344株結核分枝桿菌臨床分離株進行了基因分型。登陸http://www.miru-vntrplus.org/MIRU/index.faces網站對菌株基因型進行在線分析。對病人流行病學資料如年齡、菌株來源地等與不同基因型的相關性進行統(tǒng)計學數(shù)據分析，應用X2檢驗，P值＜0.001認為有統(tǒng)

5、計學意義。
　　 結果：
　　 344株菌株中，有3株經軟件分析為未分型的菌株。其余341株結核分枝桿菌分為4個基因群（即Beijing和Beijing近似群、T群、Manu群、S和LAM3群），24個基因型。以Beijing家族基因型分布占主導地位，其次為T基因群(包括T1、T2、T3和T4)，而Manu2及S等基因型則所占比例很小。經統(tǒng)計學分析，MDR耐藥在Beijing家族基因型中所占比例與非北京家族中所占比例差異

6、經x2檢驗無統(tǒng)計學意義(X2=1.46，p＞0.05);一線藥物任意耐藥與北京家族的聯(lián)系也未達到統(tǒng)計學的意義。河南省較年輕人群(＜25、26-40、41-60)感染的結核分枝桿菌中，北京家族基因型所占比例高于年老組（即＞60歲組），尤其以＜25歲年齡組北京家族基因型所占比例最高，達到98.7％。本次研究所選的5個地區(qū)中，北京家族基因型所占比例存在差異，經X2檢驗，P＜0.001，有統(tǒng)計學意義。
　　 結論：
　　 1．北

7、京家族基因型在河南省占87.7％（299/341），占主導地位。T群占10.5％，Manu2群、S群和LAM3群等共占1.48％。
　　 2．北京家族基因型與耐藥無明顯相關性，說明Beijing家族基因型與耐藥間無相關性。
　　 3．河南省北京家族基因型的感染與年齡有相關性，較年輕人群＜25、26-40、41-60)感染的結核分枝桿菌中，北京家族基因型所占比例高于年老組（即＞60歲組），提示近期傳播的北京家族基因型在這一