miR-34a在甲狀腺癌中的表達及意義.pdf

1、MicroRNA，簡稱miRNA，是近年來分子生物學和遺傳學領域的研究熱點。MiRNA是一類新近發(fā)現的全長約為21-25個核苷酸長度的內源性非編碼單鏈小分子RNA，它的主要作用是通過綁定下游靶基因的mRNA上互補的3'-非翻譯區(qū)來下調蛋白的表達，從而發(fā)揮對細胞增殖，分化，侵襲和凋亡等過程的調控作用，并且與許多腫瘤的發(fā)生，發(fā)展相關。有證據顯示miRNA在癌與正常細胞之間存在差異表達。miRNA的異常表達可通過調節(jié)參與癌癥相關進程的基因及旁

2、路途徑影響腫瘤的進展，提示其可能扮演著類似于抑癌基因或原癌基因的角色，調控著腫瘤細胞多種重要的生物學行為。
　　 甲狀腺癌是最常見的內分泌惡性腫瘤，約占人類所有惡性腫瘤的1-2％，近年來許多研究顯示其發(fā)病率呈不斷上升的趨勢[1]。臨床中最常見的類型為甲狀腺乳頭狀癌(PTC)，約占甲狀腺癌的80％[2]，早期易發(fā)生區(qū)域淋巴轉移，轉移率可達30-50％[3]。目前，甲狀腺癌的發(fā)病機制尚不是十分清楚。近年來研究發(fā)現甲狀腺癌中可見一些m

3、iRNAs表達異常，2005年He等[4]亦首次揭示了甲狀腺乳頭狀癌(PTC)及甲狀腺正常組織中miRNAs的表達譜。
　　 本研究，我們在前期高通量的生物芯片技術篩檢甲狀腺癌中異常表達的microRNA的研究基礎上，參考國內外相關文獻報道，確立了miR-34a作為我們研究的重點。利用Northern blotting技術和實時熒光定量RT-PCR技術檢測miR-34a在甲狀腺癌組織與癌周非瘤組織中的表達差異，并評估它與甲狀腺癌

4、臨床病理資料的關系，通過細胞轉染后的細胞增殖檢測(MTS)和流式細胞儀技術分析miR-34a對甲狀腺癌增殖和細胞周期的影響，初步探討其在甲狀腺癌發(fā)生，發(fā)展中的作用。
　　 目的:
　　 探討甲狀腺癌中miR-34a的表達及其與臨床病理資料的聯系，并探討其對甲狀腺癌細胞增殖和細胞周期的影響。
　　 方法:
　　 甲狀腺癌病人術后的腫瘤和癌周非瘤組織標本共42例被收集和提取純化得高質量的RNA，運用North

5、ern blotting及實時熒光定量RT-PCR技術檢測miR-34a在甲狀腺癌組織及癌周非瘤組織中的表達水平，采用scion image軟件和2-△△Ct算法量化miR-34a表達的相關數據，并將其與術后病理參數相聯系，統計學分析miR-34a之于甲狀腺癌臨床病理資料間的關系。細胞水平上，通過轉染miR-34a成熟體入甲狀腺癌細胞株（BHP和ARO細胞），利用MTS法和流式細胞儀等方法檢測其對細胞增殖和細胞周期的影響。
　　

6、 結果:
　　 1.Northern blotting及實時熒光定量RT-PCR結果均顯示miR-34a在人甲狀腺癌組織中較相應癌周非瘤組織呈現顯著性高表達。
　　 2.熒光實時定量RT-PCR發(fā)現甲狀腺癌組織中miR-34a的表達水平與腫瘤大小和惡性程度呈現負相關，miR-34a表達越高，其腫瘤越小，惡性程度越低。反之則更易出現高分期，多灶性及大病灶的甲狀腺癌，各組間具有統計學差異。
　　 3.轉入miR-34

7、a成熟體的甲狀腺癌細胞株BHP和ARO細胞的生長增殖水平均顯著降低，且BHP細胞被阻滯在GO/G1期，分裂期細胞顯著減少，而ARO細胞似乎對miR-34a的細胞周期阻滯作用不敏感。
　　 結論:
　　 甲狀腺癌組織中的miR-34a較癌周非瘤組織高表達，但其在甲狀腺癌中的表達水平與腫瘤的大小和惡性程度呈現負相關。MiR-34a可能在甲狀腺癌發(fā)生的早期作為自身保護性因素被誘導調高，其通過調控細胞周期，抑制細胞增殖等因素對抗