棉大卷葉螟絲素重鏈基因的克隆、功能驗證及在生產(chǎn)上的應用.pdf

1、棉大卷葉螟(Sylepta derogata Fabricius)是鱗翅目螟蛾科昆蟲，分布范圍廣、寄主種類多，能對多種經(jīng)濟作物產(chǎn)生較大危害。為了進一步研究棉大卷葉螟的吐絲危害機理，本文以棉大卷葉螟的絲素重鏈基因為研究對象，克隆得到其cDNA全長序列，測定了不同發(fā)育階段棉大卷葉螟吐絲基因的表達量，以及取食不同寄主后棉大卷葉螟吐絲基因的表達量。在此基礎(chǔ)上，運用飼喂法干擾棉大卷葉螟絲素重基因的表達，進而影響卷葉螟的吐絲卷葉，并觀察干擾表達后對

2、棉大卷葉螟種群發(fā)育與蛹重的影響。結(jié)果如下:
　　1.根據(jù)文獻報導的其他昆蟲的絲素重鏈基因，通過RACE法克隆得到棉大卷葉螟絲素重鏈基因cDNA全長。棉大卷葉螟絲素重鏈基因cDNA全長為1465bp，起始密碼子為ATG，終止密碼子為TAG，開放閱讀框全長為1323bp。依據(jù)棉大卷葉螟絲素重鏈基因的核苷酸序列推導其氨基酸序列，估算該蛋白分子量為43.553kDa，等電點pI為6.26。將所獲得的基因全長同其他已經(jīng)登錄到GenBank的

3、昆蟲絲素重鏈基因序列進行比對，發(fā)現(xiàn)與棉大卷葉螟絲素重鏈基因序列一致性最高的是外米綴蛾(Corcyra cephalonica)，達到65％，其次為大蠟螟(Galleria mellonella)與琥珀蠶(Antheraea assama)，一致性皆為59％。
　　2.通過實時定量PCR技術(shù)，分析了不同發(fā)育階段棉大卷葉螟絲素重鏈基因的表達量，以及取食不同寄主后棉大卷葉螟絲素重鏈基因的表達量。結(jié)果表明，絲素重鏈基因表達量隨蟲態(tài)、蟲齡的

4、不同而不同:2齡、4齡幼蟲以及預蛹期絲素重鏈基因表達量相對較高，其中2齡蟲絲素重鏈基因表達量最高;3齡、5齡幼蟲絲素重鏈基因表達量相對較低，蛹期及羽化后絲素重鏈基因的表達量更低，甚至近于零;取食不同寄主后棉大卷葉螟絲素重鏈基因的表達量不同，飼喂苘麻葉片的棉大卷葉螟絲素重鏈基因的相對表達量最高，棉花次之，木槿最低，且它們之間差異顯著。
　　3.通過飼喂法干擾棉大卷葉螟幼蟲絲素重鏈基因的表達，并從菌液濃度、飼喂時間、飼喂的幼蟲蟲齡等方

5、面研究其對棉大卷葉螟絲素重鏈基因表達量的影響。菌液濃度試驗結(jié)果表明，隨著飼喂棉大卷葉螟幼蟲菌液濃度的增加，絲素重鏈基因相對表達量下降。喂食不同蟲齡棉大卷葉螟幼蟲不同天數(shù)菌液的試驗結(jié)果表明，2L、3L、4L幼蟲喂食表達dsRNA的菌液后其重鏈基因表達量均下降，且喂食表達dsRNA的菌液3天、5天后的絲素重鏈基因表達量比喂食1天的表達量顯著下降。同時，2L、4L干擾效果比3L的好。試驗結(jié)果說明，菌液濃度、飼喂時間、飼喂的幼蟲蟲齡均會對卷葉螟