藥對麻黃-附子和麻黃-桂枝的藥效學配伍機理研究.pdf

1、研究背景:
　　 藥對是臨床上常用的相對固定的配伍形式，是針對主治證候及所采用的相應治法，根據(jù)藥物的功效及藥性特點，選擇性地將兩味（或兩味以上）中藥進行配對應用。對藥對配伍機理的研究，有助于進一步揭示藥對配伍的客觀規(guī)律與科學內涵，既能指導臨床遣方用藥，更有效地運用已有的藥對，亦有利于針對疾病譜的變化、病證的發(fā)展而創(chuàng)制新藥對。而隨著藥對的作用機理與物質基礎更加明確，在新藥研究中以有效成分或有效部位配伍已越來越多，藥對配伍的普遍規(guī)律

2、同樣可以指導新的配伍形式，對中藥新產品制劑處方研創(chuàng)具有現(xiàn)實意義。
　　 國內常用于配伍的研究方法有析因分析法、正交分析法、均勻設計法、正交t值法、聚類分析法、Logistic模型評價法等。這些方法各具特色，從不同的角度揭示中藥配伍應用的機理。藥物相互作用法是藥理學在進行藥物相互作用研究中廣泛采取的評定方法，主要包括:等效線圖法(The classical isobologram approach)、改良的等效線圖法、中效法(Th

3、e median-effect method)、效應面法(Theuniversal response surface analysis)、方差分析法(ANOVA)、Q值法等。藥物相互作用方法是經過嚴謹?shù)臄?shù)學論證，具有豐富的應用經驗，完備的理論體系，并且能夠給出在整個劑量范圍內藥物的相互作用情況。將藥物相互作用評價方法引入中藥藥對配伍機理研究，能客觀評價藥對配伍是否產生藥理效應的協(xié)同和拮抗，有利于在藥效學層面揭示藥對的配伍內涵。
　

4、　 本文為國家自然科學基金重點項目“麻黃類藥對組成規(guī)律的基礎研究”（項目批準號:81030066）的部分研究工作，以藥物相互作用研究方法，從藥效學角度探討麻黃-附子和麻黃-桂枝藥對的配伍機理。
　　 研究目的:
　　 通過對麻黃-附子和麻黃-桂枝藥對藥效學相互作用關系的研究，探討其配伍機理。
　　 實驗方法:
　　 1.試驗藥物
　　 麻黃購自廣州市致信藥業(yè)有限公司，產地:吉林，批號:20101

5、002;黑順片購自四川江油中壩附子科技發(fā)展公司，批號:101002;吲哚美辛片，天津力生制藥股份有限公司，批號:110112;桂枝購自廣東省藥材公司，產地:廣西，批號:20101201;阿司匹林,舒泰神生物制藥股份有限公司，批號:110701;安乃近，廣東華南藥業(yè)集團有限公司，批號:110115;干酵母，安琪酵母股份有限公司，批號:1100105。
　　 2.動物
　　 昆明種小鼠，SPF級，18-22g; SD大鼠，S

6、PF級，160-200g，雄性;由南方醫(yī)科大學實驗動物中心提供，合格證號:SCXK粵2006-0015。
　　 3.觀察指標
　　 3.1.麻黃-附子藥對藥效學實驗
　　 3.1.1.麻黃-附子藥對不同配伍組急性毒性實驗
　　 3.1.2.麻黃-附子藥對對醋酸致小鼠扭體反應的影響
　　 3.1.3.麻黃-附子藥對對輻射熱致小鼠甩尾反應的影響
　　 3.1.4.麻黃-附子藥對相互作用實驗

7、r>　　 3.2.麻黃-桂枝藥對藥效學實驗
　　 3.2.1.麻黃-桂枝藥對不同配伍組急性毒性實驗
　　 3.2.2.麻黃-桂枝藥對對酵母致熱大鼠的解熱影響
　　 3.3.3.麻黃-桂枝藥對相互作用實驗
　　 3.3.烏頭堿和麻黃堿配伍對斑馬魚心臟毒性的初步研究
　　 4.統(tǒng)計學分析
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。實驗數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差（(X)±s）表示。結果比較運用重復測量方差

8、分析，單因素方差分析（One-way ANOVA），組間多重比較方差齊時采用LSD法，不齊時用Dunnett's T3。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 實驗結果:
　　 1.麻黃-附子藥對藥效學實驗
　　 1.1.麻黃-附子藥對不同配伍組急性毒性實驗
　　 麻黃-附子1:0.5配伍組LD50為119.1479g/kg，麻黃-附子1:1配伍組LD50為117.4859g/kg，麻黃-附子1:2配伍

9、組LD50為115.6288g/kg，麻黃組LD50為136.3061g/kg，附子組LD50為124.4897g/kg，見表2-1。利用中效法處理麻黃-附子藥對配伍組急性毒性結果，運用軟件Calcusyn處理數(shù)據(jù)。麻黃-附子1:0.5配伍組小劑量拮抗，大劑量有相加的趨勢;麻黃-附子1:1配伍組小劑量有相加的趨勢，大劑量拮抗;麻黃-附子1:2配伍組明顯拮抗，在相同效應時，CI大小的順序為:麻黃-附子1:0.5配伍組＜麻黃-附子1:1配伍

10、組＜麻黃-附子1:2配伍組，麻黃與附子三個配伍組的拮抗的強弱大小為:麻黃-附子1:0.5配伍組＜麻黃-附子1:1配伍組＜麻黃-附子1:2配伍組，隨著附子用量的增加，麻黃與附子配伍急性毒性的拮抗作用明顯增強。
　　 1.2.麻黃-附子藥對對醋酸致小鼠扭體反應的影響
　　 各組小鼠的扭體潛伏期經One-way ANOVA分析組間有顯著性差異（F=6.349，P=0.000），需進一步兩兩比較;各組小鼠的扭體次數(shù)經One-wa

11、yANOVA分析組間有顯著性差異(F=6.282，P=0.000)，也需進一步兩兩比較。結果:對于扭體潛伏期，吲哚美辛組、附子2組、麻黃-附子1:1配伍的高、中劑量及麻黃-附子1:0.5配伍組、全方組與模型組比較均有顯著性差異（P＜0.05），而麻黃組、附子0.5組、附子1組、麻黃-附子1:1配伍低劑量組、麻黃-附子1:2配伍組與模型組比較無顯著性差異(P＞0.05);對于扭體次數(shù)，吲哚美辛組、麻黃組、附子1組、附子2組、麻黃-附子1:

12、1配伍高劑量組、麻黃-附子1:1配伍中劑量組、麻黃-附子1:0.5配伍組、麻黃-附子1:2配伍組及全方組與模型組比較均有顯著性差異（P＜0.01），而麻黃-附子1:1配伍低劑量組與模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)。麻黃-附子1:0.5配伍組、麻黃-附子1:1配伍組和麻黃-附子1:2配伍組三個組兩兩比較均無顯著性差異(P＞0.05)，三個配伍組與全方組兩兩比較也無顯著性差異(P＞0.05)。故除了麻黃-附子1:1配伍低劑量組，其他各

13、給藥組均能顯著延長小鼠的扭體潛伏期，減少小鼠扭體次數(shù)。
　　 1.3.麻黃-附子藥對對輻射熱致小鼠甩尾反應的影響各組小鼠的甩尾時間經One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=7.294，P=0.000)，需進一步兩兩比較。結果:吲哚美辛組、麻黃組、附子0.5組、附子1組、附子2組、麻黃-附子1:1配伍高、中劑量組、麻黃-附子1:0.5配伍組、麻黃-附子1:2配伍組及全方組與模型組比較均有顯著性差異（P＜0.05），而麻

14、黃-附子1:1配伍低劑量組與模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)。麻黃-附子1:0.5配伍組、麻黃-附子1:1配伍組和麻黃-附子1:2配伍組三個組兩兩比較均無顯著性差異(P＞0.05)。而三個配伍組與全方組兩兩比較也無顯著性差異(P＞0.05)。故除了麻黃-附子1:1配伍低劑量組，其他各給藥組均能顯著延長小鼠的甩尾時間。
　　 1.4.麻黃-附子藥對相互作用實驗
　　 麻黃-附子藥對配伍相互作用分析采用中效法，運用軟件

15、Calcusyn對數(shù)據(jù)進行處理。根據(jù)前面藥效實驗結果，利用麻黃-附子1:1配伍組繼續(xù)研究麻黃與附子配伍的相互關系。選定麻黃、附子及麻黃-附子1:1配伍組的不同劑量進行實驗。由Calcusyn軟件處理得出，在鎮(zhèn)痛效應小于80％時， CI＜1，麻黃與附子配伍在鎮(zhèn)痛效應上有協(xié)同的作用。
　　 2.麻黃-桂枝藥對藥效學實驗
　　 2.1.麻黃-桂枝藥對不同配伍組急性毒性實驗
　　 麻黃-桂枝1:0.5配伍組LD50為13

16、8.1220g/kg，麻黃-桂枝1:1配伍組LD50為233.2471g/kg，麻黃-桂枝1:2配伍組LD50為218.5646g/kg，麻黃組LD50為139.3681g/kg，桂枝組LD50為236.6691g/kg，見表3-1。桂枝用量的增加，提高了LD50，上抬了95％可信區(qū)間。利用中效法處理麻黃-桂枝藥對配伍組急性毒性結果，運用軟件Calcusyn處理數(shù)據(jù)。見圖1，由圖可知CI＞1，故麻黃與桂枝三個配伍組均具有拮抗作用，在相同

17、效應時，CI大小的順序為:麻黃-桂枝1:0.5組＜麻黃-桂枝1:1配伍組＜麻黃-桂枝1:2配伍組。麻黃與桂枝三個配伍組的拮抗的強弱大小為:麻黃-桂枝1:0.5配伍組＜麻黃-桂枝1:1配伍組＜麻黃-桂枝1:2配伍組，隨著桂枝用量的增加，麻黃與桂枝配伍急性毒性的拮抗作用明顯增強。
　　 2.2.麻黃-桂枝藥對對酵母致熱大鼠的解熱影響
　　 各組大鼠給藥后不同時間體溫升高值采用重復測量和單因素方差分析，時間點和組別之間有交互效

18、應（F=5.264，P=0.000）;組別之間有主效應(F=7.333，P=0.000);各時間點之間有主效應（F=69.925，P=0.000），需進行兩兩比較。各時間點采用one-way ANOVA，各組之間采用的是共有時間點主效應的重復測量方差分析。
　　 各時間點采用one-way ANOVA分析，大鼠在給藥后1h各組間無顯著差異（F=1.849，P=0.052）。大鼠在給藥后2h，各組間有顯著差異(F=6.441，P=

19、0.000)。與模型組比較，安乃近組、阿司匹林組、桂枝1組、桂枝2組、麻黃-桂枝1:1配伍高劑量組、麻黃-桂枝1:1配伍中劑量組、麻黃-桂枝1:2配伍組及麻黃湯全方組均有顯著性差異（P＜0.05），而麻黃組、桂枝0.5組、麻黃-桂枝1:1配伍低劑量組、麻黃-桂枝1:0.5配伍組與模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)。麻黃-桂枝1:0.5配伍組、麻黃-桂枝1:1配伍組、麻黃-桂枝1:2配伍組及麻黃湯全方組，經兩兩比較均無顯著性差異(P＞

20、0.05)。大鼠在給藥后3h，各組間有顯著差異（F=12.211，P=0.000）。所有給藥組與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.05)，麻黃-桂枝1:0.5配伍組、麻黃-桂枝1:1配伍組、麻黃-桂枝1:2配伍組及麻黃湯全方組，經兩兩比較也均無顯著性差異(P＞0.05)。故，麻黃-桂枝藥對對干酵母致大鼠發(fā)熱有解熱作用
　　 2.3.麻黃-桂枝藥對相互作用實驗
　　 麻黃-桂枝藥對配伍相互作用分析采用中效法，運用軟件Cal

21、cusyn對數(shù)據(jù)進行處理。根據(jù)前面藥效實驗結果，利用麻黃-桂枝1:1配伍組繼續(xù)研究麻黃與桂枝配伍的相互關系。選定麻黃、桂枝及麻黃-桂枝1:1配伍組的不同劑量進行實驗。經Calcusyn軟件處理得到判斷藥物相互作用關系的CI值， CI＜1，故麻黃與桂枝配伍在解熱效應上有協(xié)同的作用。
　　 3.烏頭堿和麻黃堿配伍對斑馬魚心臟毒性的初步研究
　　 隨著烏頭堿濃度的增加，斑馬魚胚胎心臟毒性增加;同一濃度下，隨著烏頭堿作用時間的延

22、長，胚胎的心臟毒性越大。且麻黃堿和烏頭堿配伍時，隨著麻黃堿濃度的增加，胚胎心臟毒性增加。
　　 結論:
　　 1.利用Calcusyn軟件處理麻黃與附子配伍的急性毒性實驗結果得，麻黃與附子配伍的急性毒性主要為拮抗作用，在相同效應時，麻黃與附子三個配伍組的拮抗的強弱大小為:麻黃-附子1:0.5配伍組＜麻黃-附子1:1配伍組＜麻黃-附子1:2配伍組，隨著附子用量的增加，麻黃與附子配伍急性毒性的拮抗作用明顯增強。
　　

23、 2.通過醋酸扭體實驗和輻射熱甩尾實驗證明麻黃-附子藥對有鎮(zhèn)痛作用。麻黃-附子1:0.5配伍組、麻黃-附子1:1配伍組、麻黃-附子1:2配伍組及麻黃附子細辛湯全方組，經兩兩比較均無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 3.由Calcusyn軟件處理判斷麻黃與附子配伍的相互作用關系，在鎮(zhèn)痛效應大于80％時， CI＜1，麻黃與附子配伍在鎮(zhèn)痛效應上有協(xié)同的作用。
　　 4.利用Calcusyn軟件處理麻黃與桂枝的急性毒性實驗結果

24、，麻黃與桂枝配伍的急性毒性為拮抗作用，在相同效應時，麻黃與桂枝三個配伍組的拮抗的強弱大小為:麻黃-桂枝1:0.5配伍組＜麻黃-桂枝1:1配伍組＜麻黃-桂枝1:2配伍組，隨著桂枝用量的增加，麻黃與桂枝配伍急性毒性的拮抗作用明顯增強。
　　 5.通過干酵母造成大鼠發(fā)熱模型，麻黃-桂枝藥對對皮下注射干酵母引起的大鼠發(fā)熱具有解熱作用。麻黃-桂枝1:0.5配伍組、麻黃-桂枝1:1配伍組、麻黃-桂枝1:2配伍組及麻黃湯全方組，經兩兩比較均無