腸缺血再灌注肝肺損傷機(jī)制及鼠尾草酚保護(hù)作用的研究.pdf

1、本研究采用大鼠腸缺血再灌注模型，探討肝肺損傷的機(jī)制以及鼠尾草酚預(yù)處理對肝肺損傷的保護(hù)作用，為腸缺血多臟器損傷保護(hù)提供一種有效可靠的預(yù)處理藥物和方法，也為迷迭香的開發(fā)提供更有利的依據(jù)。 第一部分：NFκB在大鼠腸缺血再灌注肝肺損傷發(fā)病機(jī)制中的作用目的：探討NFκB在腸缺血再灌注肝肺損傷發(fā)病機(jī)制中的作用及其脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(PDTC)對P-選擇素(P-selectin)、細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)的表達(dá)和中性粒細(xì)胞浸潤

2、的影響。 方法：Wistar大鼠24只隨機(jī)分成對照組(Control組)、腸缺血再灌注組(I/R組)和PDTC治療組(PDTC組)，每組8只。I/R和PDTC組大鼠行腸系膜上動脈夾閉1小時(shí)再灌注2小時(shí)。PDTC組于缺血前1小時(shí)給予PDTC100mg/kg腹腔注射。觀察肝肺組織病理學(xué)、肝功能、肺組織干濕比及支氣管肺泡灌洗蛋白(bronchiaalveoluslavagefluidprotein，BALFP)含量的變化，檢測血清腫瘤

3、壞死因子α(Tumornecrosisfactorα，TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)，肝肺組織勻漿超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)和髓過氧化物酶(MPO)水平。免疫組化法觀察肝肺組織ICAM-1、P-selectin和NFκB表達(dá)并采用Westernblot法檢測肝肺組織ICAM-1及NFκB的水平。 結(jié)論：腸缺血1小時(shí)再灌注2小時(shí)誘發(fā)了肝肺組織損傷和全身系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)。肝肺組織有明顯的出血、滲出、中性粒細(xì)胞浸

4、潤和ICAM-1及P-selectin的表達(dá)增強(qiáng)，其與肝肺組織的NFκB表達(dá)相平行，說明NFκB的活化在腸缺血再灌注肝肺損傷過程中起重要作用。PDTC通過抑制NFκB活性對腸缺血再灌注肝損傷起保護(hù)作用。 第二部分：蛋白酶體在大鼠腸缺血再灌注肝肺損傷發(fā)病機(jī)制中的作用目的：探討蛋白酶體在腸缺血再灌注肝肺損傷發(fā)病中的作用以及蛋白酶體抑制劑乳孢素對蛋白酶體活性、炎癥信號傳導(dǎo)通路的影響。 方法：Wistar大鼠32只隨機(jī)分成對照組

5、(Control組)、腸缺血再灌注組(I/R組)、0.2mg/kg乳孢素預(yù)處理組(0.2mg/kg組)和0.6mg/kg乳孢素預(yù)處理組(0.6mg/kg組)，每組8只。I/R組、0.2mg/kg組和0.6mg/kg組大鼠行腸系膜上動脈夾閉1小時(shí)再灌注4小時(shí)，預(yù)處理組于術(shù)前1小時(shí)分別給予0.2mg/kg和0.6mg/kg乳孢素行腹腔注射。對照組及I/R組給予等量生理鹽水。觀察大鼠腸、肝、肺組織病理學(xué)、肝功能(AST、ALT)、肺組織含水率

6、和血清CK-B活性，檢測白細(xì)胞蛋白酶體20S的活性和血清TNF-α水平，測定腸、肝、肺組織勻漿MPO水平。采用免疫組化法觀察肝肺組織ICAM-1和NFκB表達(dá)并用Westernblot法檢測其含量。 結(jié)論：腸缺血1小時(shí)再灌注4小時(shí)引起肝肺損傷，其程度與血清TNF-α水平及NFκB的表達(dá)相平行，NFκB參與了這一損傷過程。使用蛋白酶體抑制劑乳孢素有效地降低了白細(xì)胞蛋白酶體20S的活性，同時(shí)減輕了(1)腸道缺血引起的腸肝肺損傷；(2)

7、腸、肝、肺組織的白細(xì)胞侵潤；(3)降低血漿TNF-α水平；(4)降低肝肺組織ICAM-1和NFκBp65的蛋白表達(dá)。蛋白酶體在腸缺血再灌注肝肺損傷炎癥調(diào)解信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的通路中發(fā)揮了重要的作用，為蛋白酶體抑制劑在臨床上的應(yīng)用供了依據(jù)。 第三部分：鼠尾草酚對腸缺血再灌注肝肺損傷的保護(hù)作用 目的：探討鼠尾草酚(carnosol)預(yù)處理對大鼠腸道缺血再灌注肝肺損傷的保護(hù)作用，為腸缺血再灌注肝肺損傷的保護(hù)提供一種有效可靠的預(yù)處理藥物和

8、方法，為迷迭香的開發(fā)提供更有利的依據(jù)。 方法：雄性Wistar大鼠42只，隨機(jī)分為7組(n=6)：對照組(control組)、腸缺血1小時(shí)再灌注2小時(shí)組(I/R2組)、再灌注4小時(shí)組(I/R4組)、再灌注6小時(shí)組(I/R6組)以及相應(yīng)缺血再灌注鼠尾草酚預(yù)處理組(分別為：Carnorsol2組、carnosol4組、carnorsol6組)。大鼠10﹪水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉后，上腹正中切口入腹，control組大鼠剖

9、腹后分離腸系膜上動脈但不結(jié)扎；I/R組采用Megison法制作腸缺血再灌注模型，分離并結(jié)扎腸系膜上動脈1小時(shí)按照分組情況分別再灌注2、4和6小時(shí)；Carnosol預(yù)處理組手術(shù)操作同I/R組，術(shù)前1小時(shí)給予carnorsol3mg/kg腹腔注射。對照組和I/R組給予等量10﹪二甲基亞砜。分別進(jìn)行肝肺組織的病理學(xué)、肝臟功能和肺泡BALFP的測定。測定血清IL-6水平、肝肺組織SOD和MPO活性。同時(shí)采用免疫組化法和Westernblot法進(jìn)