龍膽草與高良姜對(duì)能量代謝相關(guān)基因表達(dá)影響的研究.pdf

1、中藥四性(即寒、熱、溫、涼)理論是中藥藥性理論的核心。寒為涼之甚，熱為溫之極，故從四性本質(zhì)屬性而言，只有寒熱兩性之分。“療寒以熱藥，療熱以寒藥”，是中醫(yī)臨床用藥的重要依據(jù)。寒熱皆與機(jī)體能量代謝息息相關(guān)。然而寒、熱性中藥作用于機(jī)體能量代謝具體靶點(diǎn)和通路，以及寒性、熱性中藥影響能量代謝的作用機(jī)制并不清楚。
　　 龍膽草(Radix gentianae)性寒、味苦，為典型寒藥。高良姜(Alpiniaofficinarum Hance)

2、性熱、味辛，為典型熱藥。線粒體是細(xì)胞能量代謝主要的場(chǎng)所。線粒體轉(zhuǎn)錄因子A(TFAM)、核呼吸因子(NRF)和過氧化物酶增殖激活受體γ輔激活因子(PGC-1α)是能量代謝重要的調(diào)節(jié)因子。DNA是調(diào)控基因表達(dá)的一種重要的表觀遺傳修飾方式。本研究以典型寒藥龍膽草和典型熱藥高良姜為研究對(duì)象，采用氧電極法、高效液相色譜、熒光定量PCR等方法(1)探討它們對(duì)正常大鼠肝臟和骨骼肌能量代謝部分指標(biāo)的影響；(2)探討龍膽草對(duì)熱證大鼠能量代謝指標(biāo)、調(diào)節(jié)能量

3、代謝因子基因表達(dá)和DNA甲基化有關(guān)的基因(Dnmt3a、Mbd4和Gdd45a)表達(dá)的影響。(3)探討高良姜對(duì)寒證大鼠能量代謝指標(biāo)、調(diào)節(jié)能量代謝因子基因表達(dá)和DNA甲基化有關(guān)的基因表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果表明：
　　 (1)寒藥龍膽草顯著增加正常大鼠肌糖原含量，減少正常大鼠血清游離脂肪酸的含量，降低了正常大鼠肝臟和骨骼肌琥珀酸脫氫酶(SDH)、Na+，K+-ATP酶和ca2+-ATP酶活性。熱藥高良姜能顯著減少正常大鼠肝

4、糖原和肌糖原含量，增加了大鼠血清游離脂肪(NEFA)含量，升高了肝臟和骨骼肌SDH、Na+，K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性。寒性中藥龍膽草和熱性中藥高良姜對(duì)正常動(dòng)物的能量代謝相關(guān)指標(biāo)有相反的作用。
　　 (2)龍膽草能顯著降低熱證模型大鼠體溫，有效降低模型大鼠肝臟SDH活性，并能升高Na+，K+-ATP酶活性，提高RCR、ADP/O和EC值，提高ATP/AMP比值。高劑量龍膽草還能顯著降低Cox4 mRNA水平。低劑量龍

5、膽草顯著增加模型Nrf-1mRNA水平。寒藥龍膽草能緩解酵母所致熱證模型(體溫升高)大鼠部分異常指標(biāo)，能糾正或部分糾正熱證模型的異常能量代謝相關(guān)指標(biāo)。
　　 (3)高良姜能顯著升高寒證模型大鼠體溫，有效提高血清NEFA水平，提高寒證大鼠Ca2+-ATP酶活性，提高ATP/ADP比值和ATP/AMP比值，增加大鼠自主活動(dòng)和EC值。而高劑量高良姜還能有效提高模型大鼠SDH活性，RCR和ADP/O，降低Nrf-2α mRNA水平。低劑

6、量高良姜能有效提高寒證大鼠Na+，K+-ATP酶活性。所以熱藥高良姜能緩解利血平所致寒證模型大鼠部分異常指標(biāo)，能糾正或部分糾正熱證模型的異常能量代謝相關(guān)指標(biāo)。
　　 (4)龍膽草能顯著上調(diào)正常大鼠骨骼肌Dnmt3α和Gdd45α基因的表達(dá)。陽性對(duì)照(甲狀腺摘除組)大鼠骨骼肌Dnmt3α、Mbd4和Gdd45α mRNA水平都顯著增加。龍膽草和甲狀腺摘除可能都有促進(jìn)正常大鼠骨骼肌某些基因甲基化作用。高良姜對(duì)正常動(dòng)物骨骼肌Dnmt3

7、α mRNA水平?jīng)]有顯著的影響。陽性對(duì)照組(甲狀腺片處理組)動(dòng)物中Dnmt3α也顯著增加。
　　 (5)酵母所致熱證大鼠肝臟Dnmt3α和Mbd4 mRNA表達(dá)量都有顯著下降，高劑量龍膽草治療組的Dnmt3α、Mbd4和Gdd45α mRNA水平與熱證模型組沒有顯著差別。低劑量龍膽草組的Dnmt3α和Mbd4 mRNA水平比熱證模型組都有增加的趨勢(shì)，但是也未達(dá)到顯著水平。
　　 (6)利血平所致寒證大鼠肝臟Dnmt3α

8、mRNA表達(dá)量有顯著降低，而Mbd4和Gdd45α mRNA水平與空白對(duì)照組沒有顯著差別。高良姜治療組對(duì)寒證模型大鼠肝臟Dnmt3α和Gdd45α mRNA表達(dá)量沒有顯著改變，但能顯著增加寒證模型大鼠Mbd4 mRNA表達(dá)水平。
　　 論文從表觀遺傳學(xué)角度首次探討了龍膽草和高良姜對(duì)DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶和DNA去甲基化相關(guān)因子的影響，對(duì)進(jìn)一步深入探討表觀遺傳學(xué)與中藥的關(guān)系，提供了試驗(yàn)數(shù)據(jù)支持；分析了甲狀腺功能亢進(jìn)和低下大鼠模型DNA