HCMV先天性潛伏感染Balb-c老年小鼠的細(xì)胞免疫狀態(tài)與AD樣病理改變的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：在已建立的HCMV先天性中樞神經(jīng)系統(tǒng)潛伏感染Balb/c老年小鼠模型的基礎(chǔ)上，檢測老年模型小鼠的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)，同時(shí)觀察大腦皮質(zhì)的AD樣病理改變，初步探討HCMV先天性潛伏感染老年Balb/c小鼠細(xì)胞免疫功能降低與AD發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。 方法：隨機(jī)選取HCMV先天性潛伏感染組(A組)、HCMV先天性潛伏感染再激活組(B組)及HF細(xì)胞對照組(C組)18～20月齡老年雌性小鼠各5只，眼眶取血并引頸處死后，無菌取小鼠大腦組織和

2、脾臟，分別作如下試驗(yàn)：(1)體外細(xì)胞共培養(yǎng)病毒分離試驗(yàn)、PCR、RT-PCR和原位雜交等方法確立三組小鼠腦組織中HCMV感染及感染狀態(tài)；(2)大腦皮質(zhì)中AD相關(guān)病理及分子檢測：HE染色檢測小鼠大腦皮質(zhì)構(gòu)筑和病理改變；剛果紅染色檢測腦組織中的淀粉樣斑塊；鍍銀染色檢查大腦皮質(zhì)中的神經(jīng)原纖維纏結(jié)和淀粉樣斑塊；RT-PCR檢測腦中APP的表達(dá)量；(3)小鼠細(xì)胞免疫狀態(tài)檢測：流式細(xì)胞儀分別檢測全血細(xì)胞中和脾臟細(xì)胞懸液中CD3+/CD4+/CD8+

3、T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的改變；脾臟HE染色，觀察其組織構(gòu)筑和其淋巴細(xì)胞數(shù)量的改變。 結(jié)果：(1)腦組織中HCMV感染及感染狀態(tài)檢測：A組和B組小鼠腦細(xì)胞與HF細(xì)胞共培養(yǎng)病毒分離試驗(yàn)檢測顯示均可分離到HCMV；腦組織PCR和原位雜交均檢測到HCMVDNA，但RT-PCR結(jié)果顯示，A組小鼠腦內(nèi)無HCMVmRNA表達(dá)，B組小鼠腦內(nèi)HCMVmRNA表達(dá)；說明A組小鼠腦組織中HCMV處于潛伏感染狀態(tài)，B組小鼠腦組織中HCMV被再激活處于活動(dòng)性

4、感染狀態(tài)，C組小鼠腦組織的上述檢測結(jié)果均為陰性，即無HCMV感染。(2)AD相關(guān)病理及分子檢測：HE染色發(fā)現(xiàn)A及B組小鼠大腦皮質(zhì)區(qū)及海馬區(qū)出現(xiàn)明顯的病理變化，具體表現(xiàn)為大腦皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目明顯減少，殘留神經(jīng)元核腫脹淡染，神經(jīng)突起較少等，呈退行性改變；海馬區(qū)細(xì)胞水腫、胞質(zhì)疏松、突起變少，錐體細(xì)胞顆粒明顯減少并發(fā)生空泡化、細(xì)胞層數(shù)減少等；B組小鼠腦組織大腦皮質(zhì)及海馬區(qū)出現(xiàn)A組類似的病理改變且較A組更為明顯；C組腦組織未見明顯病理變化；剛果

5、紅染色發(fā)現(xiàn)A組及B組小鼠大腦皮質(zhì)中均有淀粉樣斑塊；鍍銀染色發(fā)現(xiàn)A組及B組小鼠大腦皮質(zhì)中有神經(jīng)原纖維纏結(jié)和淀粉樣斑塊；RT-PCR檢測APP結(jié)果顯示，A組和B組小鼠APP相對表達(dá)量明顯均明顯高于C組小鼠，差異有顯著性(P＜0.01)，而B組和A組間沒有明顯差異(P＞0.05)。(3)小鼠細(xì)胞免疫狀態(tài)檢測：脾臟HE染色顯示，A組和C組紅髓區(qū)淋巴細(xì)胞密度無明顯差異，但A組淋巴細(xì)胞出現(xiàn)核腫大淡染，白髓區(qū)不規(guī)整；B組淋巴細(xì)胞密度較A組和C組明顯降

6、低，白髓結(jié)構(gòu)不規(guī)則，紅髓區(qū)脾索和脾竇明顯，存在較多竇壁細(xì)胞；流式細(xì)胞儀檢測T淋巴細(xì)胞亞群顯示，小鼠外周血中CD3+細(xì)胞比在A、B、C三組中的均值分別為33.0533％、6.5833％、43.1833％，組間差異有顯著性(P＜0.01)；CD4+細(xì)胞比在A、B、C三組中的均值依次為66.08％、59.9833％、65.78％，B組和A組及C組差異均有顯著性(P＜0.01)，而在A組和C組間無明顯差異(P＞0.05)；CD8+細(xì)胞比在A、B

7、、C三組中的均值依次為23.2667％、11.5％、18.6167％，組間差異均有顯著性(P＜0.01)；CD4+CD8+細(xì)胞比在A、B、C三組中的均值依次為9.9％、16.8167％、11.9167％，組間差異均有顯著性(P＜0.05)。脾臟細(xì)胞細(xì)胞懸液中CD3+、CD4+、CD8+以及CD4+CD8+細(xì)胞檢測結(jié)果同外周血的檢測一致。 結(jié)論：HCMV先天性潛伏感染引起老年小鼠腦內(nèi)出現(xiàn)AD樣病理改變，同時(shí)小鼠機(jī)體細(xì)胞免疫功能降低