人巨細胞病毒先天性感染與非先天性感染對子代大鼠學習記憶影響的實驗研究.pdf

1、目的：本實驗通過建立先天性及非先天性人巨細胞病毒感染的SD大鼠模型，研究大鼠先天性與非先天性人巨細胞病毒（Human cytomegalovirus,HCMV）感染對子代大鼠海馬NMDA受體NR1、NR2B亞基表達及學習記憶能力的影響，從而探討臨床防治巨細胞病毒感染的時機選擇極其重要性。
　　方法：
　　（1）選取8周齡雌性SPF級SD大鼠18只，按照雌雄2:1配對，懷孕大鼠隨機分為對照組、先天性HCMV感染組和非先天性HC

2、MV感染組，每組各6只。在孕第7~8天，先天性感染組的孕鼠行腹腔內(nèi)注射5×107L－1半數(shù)組織培養(yǎng)感染量（TCID50）HCMV懸液0.8mL，對照組的孕鼠腹腔內(nèi)注射等量的人胚肺成纖維細胞上清液，非先天性感染組仔鼠于生后第2天顱內(nèi)注射相同HCMV懸液15ul。
　?。?）實驗前后觀察對比孕鼠及子代大鼠的行為學變化；子代大鼠生后4周分別每組隨機抽取6只，運用Morris水迷宮的方法對比評價子代大鼠的學習記憶功能；
　　（3）子

3、代大鼠出生后4周分別從每組隨機抽取8只，取出仔鼠腦組織，采用HE染色的方法觀察仔鼠海馬的形態(tài)學變化及病理學改變；應(yīng)用免疫組織化學方法檢測大鼠海馬組織NMDA受體NR1、NR2B亞基表達情況。
　?。?）采用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)后分析。
　　結(jié)果：
　?。?）行為學觀察：對照組孕鼠及子代大鼠無異常表現(xiàn)，實驗組（先天性感染組與非先天性感染組）均出現(xiàn)明顯的行為學異常表現(xiàn)。
　?。?）HE染色病理學：對

4、照組海馬結(jié)構(gòu)正常，無神經(jīng)細胞缺失現(xiàn)象，細胞排列整齊均勻，胞核完整，核仁明顯；與對照組比較，實驗組（先天性感染組與非先天性感染組）子代大鼠出現(xiàn)不同程度的海馬區(qū)神經(jīng)元缺失或水腫、組織結(jié)構(gòu)松散、顆粒層細胞減少、細胞核消失等現(xiàn)象。
　?。?）子代大鼠Morris水迷宮實驗：先天性感染組子代大鼠第1~4天的逃避潛伏期分別（dl:95.83±18.36；d2:70.36±11.52；d3:52.73±11.39；d4:38.96±5.27），

5、比對照組第1~4天逃避潛伏期（dl:46.98±16.74；d2:29.83±10.64；d3:22.41±12.16；d4:15.69±6.24）延長，兩組間差異存在顯著性（P<0.01）；非先天性感染組子代大鼠第1~4天的逃避潛伏期分別（dl:89.69±16.15；d2:68.27±9.83；d3:49.85±12.21；d4:35.41±5.51），比對照組間差異存在顯著性（P<0.01）。Morris水迷宮空間探索能力比較,先

6、天性感染組穿越平臺次數(shù)3.96±1.47,顯著低于對照組7.95±1.59（P<0.01）；非先天性感染組穿越平臺次數(shù)4.38±1.22，亦顯著低于對照組（P<0.01）。先天性感染組目標象限游泳時間占總時間的百分數(shù)（0.19±0.16）、非先天性感染組（0.23±0.10），也均低于對照組（0.45±0.12）,差異具有顯著性（P<0.01）。（4）子代大鼠免疫組織化學結(jié)果顯示：海馬DG區(qū)，先天性感染組NR1（0.176土0.033）

7、、NR2B（0.120土0.029），非先天性感染組NR1（0.202土0.036）、NR2B（0.141土0.026）較對照組NR1（0.286土0.031）、NR2B（0.182土0.024）均降低，差異有統(tǒng)計學意義（Pa＜0.01）。海馬CA1區(qū)，先天性感染組NR1（0.232土0.021）、NR2B（0.189土0.027），非先天性感染組NR1（0.257土0.028）、NR2B（0.215土0.024）較對照組NR1（0.3

8、21土0.026）、NR2B（0.283土0.023）均降低，差異有統(tǒng)計學意義（Pa＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　（1）人巨細胞病毒先天性感染組和非先天性感染組大鼠模型建立成功；
　　（2）根據(jù)Morris水迷宮實驗結(jié)果，HCMV先天性感染和非先天性感染均可導(dǎo)致子代大鼠的學習和記憶能力受損；
　?。?）HCMV先天性感染組和非先天性感染組子代大鼠海馬區(qū)HE染色光鏡下觀察海馬組織,均可出現(xiàn)病理學改變；