小鼠HCMV潛伏感染UL83基因載量與再激活機(jī)率相關(guān)性研究.pdf

1、目的:該研究在用不同劑量人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染小鼠建立潛伏感染模型的基礎(chǔ)上,觀察HCMV在小鼠體內(nèi)的主要潛伏部位和各潛伏部位HCMV基因組中長(zhǎng)獨(dú)特序列(UL)區(qū)第83個(gè)基因(UL83)載量以及再激活時(shí)相應(yīng)部位UL83基因載量的變化,研究原發(fā)感染病毒量與潛伏病毒UL83基因載量的相關(guān)性,探討再激活發(fā)生機(jī)率與潛伏感染UL83基因載量之間的關(guān)系,從而為臨床預(yù)防免疫功能低下患者發(fā)生HCMV疾病尋

2、找可靠診斷指標(biāo)以及治療和監(jiān)測(cè)療效提供新思路.方法:首先確定建立潛伏感染小鼠的HCMV劑量,再建立HCMV潛伏感染小鼠的模型.將60只6~8周齡SPF級(jí)BALB/c小鼠分為5組,每組12只,雌雄各半.A、B、C組為不同劑量病毒感染組:A組腹腔注射3.5×10<'5> PFU/ml HCMV 1.0ml/只;B組腹腔注射3.5×10<'5> PFU/ml HCMV 0.75 ml/只;C組腹腔注射3.5×10<'5>PFU/ml HCMV

3、0.5 ml/只.D組、E組為對(duì)照組:D組為DMEM對(duì)照組,腹腔注射DMEM液1.0 ml/只;E組為HF正常細(xì)胞對(duì)照組,腹腔注射正常HF細(xì)胞懸液1.0 ml/只.十四個(gè)月后將各組半數(shù)的小鼠處死,分別取小鼠肺、腦及外周血白細(xì)胞進(jìn)行如下試驗(yàn):(1)制備小鼠的肺、腦皮質(zhì)勻漿及外周血白細(xì)胞進(jìn)行病毒分離;(2)透射電鏡下觀察小鼠肺和腦組織有無(wú)病毒顆粒;(3)PCR檢測(cè)HCMV UL83基因;(4)原位雜交檢測(cè)HCMV UL83基因;(5)免疫熒

4、光檢測(cè)pp65蛋白表達(dá);(6)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)HCMV UL83基因載量.同時(shí)對(duì)留下的小鼠進(jìn)行免疫抑制干預(yù),誘導(dǎo)潛伏HCMV的再激活.將每只小鼠稱重,按150mg/kg的劑量給各組小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺,每隔6天注射一次,如此共注射3次,在最后一次注射后的第六天宰殺所有小鼠,取材及檢測(cè)同前.結(jié)論:原發(fā)感染病毒量決定潛伏UL83基因載量,而潛伏UL83基因載量又決定再激活發(fā)生的部位和機(jī)率.高水平HCMV原發(fā)感染可導(dǎo)致高水平UL83基因