屎腸球菌菌毛樣蛋白基因pilA與感染相關性研究.pdf

1、研究背景：屎腸球菌為一種條件致病菌，在過去的20多年內，其感染比率迅速上升，尤其在我國，感染比率上升速度更快。由于屎腸球菌對多種常用抗生素天然耐藥，感染后的病死率高，同時不斷增多的耐萬古霉素屎腸球菌使治療更困難。屎腸球菌在醫(yī)院流行不僅與耐藥性增強有關，還可能與其體內外適應能力的增強或毒力因子的獲得有關。研究發(fā)現(xiàn)屎腸球菌類透明質酸酶（Hyalronidase，HylEfm）基因位于一個含有多種耐藥基因的可傳遞大質粒上，動物模型證實，屎腸球

2、菌一旦獲得此大質粒，其定植力及感染致死率均有所上升，說明hylEfm可能是屎腸球菌一個重要的毒力因子，但其確切的作用機制不清楚。菌毛在革蘭陽性菌中主要涉及對宿主細胞的黏附和侵襲，是一個重要的毒力因子。David S.Kim等發(fā)現(xiàn)菌毛樣結構蛋白基因pilA和hylEfm共同位于一個大質粒(pHylEfm)上，提示pilA和hylEfm基因可以通過質粒傳遞，但具體作用尚未證實。
　　目的：研究中國屎腸球菌感染率持續(xù)上升與屎腸球菌菌毛樣

3、結構蛋白基因pilA的相關性以及與hylEfm基因的聯(lián)系。
　　方法：采用紙片擴散法對137株臨床感染株行藥敏試驗，探討2009-2012年我院屎腸球菌耐藥趨勢。多重PCR法對臨床感染株、非臨床感染株行pilA、hylEfm基因檢測，運用基因測序對陽性擴增產(chǎn)物進行鑒定。接合實驗明確pilA、hylEfm在屎腸球菌間的傳遞方式，是否同時伴有耐藥基因傳遞。S1酶及I-CeuI酶法確認pilA、hylEfm的質粒或染色體定位。
　

4、　結果：4年臨床分離屎腸球菌感染株137株，檢查確認120株攜帶有pilA基因，陽性率為88％，hylEfm陽性率為15％，pilA、hylEfm皆陽性率亦為15％。非臨床感染株中，住院患者腸道定植株、社區(qū)志愿者腸道定植株pilA的攜帶率分別為70％、52％，均未發(fā)現(xiàn)hylEfm基因攜帶。接合實驗證實pilA、hylEfm基因均能通過質粒的接合轉移方式在不同菌株間進行傳遞，并同時伴有耐藥性傳遞。Southern blot發(fā)現(xiàn)pilA與h