鈣蛋白酶小亞基Capn4在肝內膽管細胞癌侵襲轉移中的作用及其與預后關系的研究.pdf

1、肝內膽管細胞癌是一種源于肝內膽管上皮細胞的原發(fā)性腺癌，發(fā)病率在原發(fā)性肝癌中次于肝細胞肝癌居第二位。雖然肝內膽管細胞癌較肝細胞癌少見，但近十年來發(fā)病率有所上升。目前手術切除是治療肝內膽管細胞癌的首選及最有效的方法，但由于早期診斷困難、手術切除率低和術后容易轉移復發(fā)，患者預后情況在過去十年內沒有明顯提高。因此，研究引起肝內膽管細胞癌發(fā)生及促進腫瘤轉移復發(fā)的關鍵因子在治療腫瘤及改善預后方面有著重要意義。
　　鈣蛋白酶是一種保守的半胱氨酸

2、蛋白酶，催化眾多特殊基質調控蛋白水解。鈣蛋白酶活性與細胞骨架重構，胞內信號轉導，細胞凋亡和細胞存活等一系列基本生理過程密切相關，其表達在腫瘤發(fā)生過程中也產(chǎn)生明顯改變。研究發(fā)現(xiàn)鈣蛋白酶小亞基Capn4在維持鈣蛋白酶結構及活性過程中發(fā)揮重要作用，我們先前的實驗也證實了Capn4與原發(fā)性肝細胞癌的侵襲復發(fā)密切相關，且可作為獨立的預測預后指標。
　　本研究檢測了Capn4在肝內膽管細胞癌患者腫瘤組織和癌旁組織中的表達。利用組織芯片技術分析

3、驗證Capn4表達與臨床病理特征的關系及其預后價值。通過RNA干擾的方法抑制肝內膽管細胞癌細胞系Capn4的表達，觀察其與腫瘤侵襲，遷移和增殖的關系，并進一步研究Capn4對MMP2表達的影響。對Capn4在肝內膽管細胞癌的侵襲與轉移中的作用進行初步探討。
　　第一部分 Capn4在肝內膽管細胞癌中表達升高
　　目的:研究Capn4在肝內膽管細胞癌和對應癌旁組織中的表達差異，分析其與肝內膽管細胞癌發(fā)生的關系。
　　方法

4、:應用qRT-PCR、western blot及免疫組化方法檢測Capn4在肝內膽管細胞癌患者腫瘤組織與對應癌旁組織中的表達差異，并進一步檢測肝內膽管細胞癌早期復發(fā)與未復發(fā)患者的腫瘤組織中Capn4表達情況。
　　結果:qRT-PCR、western blot及免疫組化結果顯示Capn4在肝內膽管細胞癌患者腫瘤組織中的表達量高于對應癌旁組織，兩者間差異有顯著性（p＜0.05）。早期復發(fā)患者Capn4表達較未復發(fā)患者明顯升高（p＜0

5、.05）。
　　結論:Capn4在肝內膽管細胞癌腫瘤組織及早期復發(fā)患者的腫瘤組織中表達升高，可能在腫瘤發(fā)生與復發(fā)過程中發(fā)揮重要作用。
　　第二部分 Capn4與肝內膽管細胞癌臨床病理特征的關系及診斷預后的價值
　　目的:檢測Capn4在肝內膽管細胞癌組織中的表達，研究其與肝內膽管細胞癌臨床病理學特征的關系及預后意義。
　　方法:應用免疫組化方法檢測140例肝內膽管細胞癌患者病理組織中Capn4表達，SPSS16.

6、0統(tǒng)計分析Capn4與臨床病理特征及預后的關系。
　　結果:Capn4高表達與肝內膽管細胞癌患者的腫瘤淋巴結轉移及TNM分期相關（p＜0.05）。Capn4高表達組術后總體生存率明顯低于Capn4低表達組(p＜0.05)，而累計復發(fā)率明顯高于Capn4低表達組（p＜0.05）。單因素及多因素分析顯示Capn4表達是患者總體生存率和累計復發(fā)率的獨立預后因子，且在有淋巴結轉移的患者中仍有預后價值。
　　結論:Capn4與肝內膽管

7、細胞癌的淋巴侵襲轉移及腫瘤TNM分期相關，具有預后價值。
　　第三部分下調Capn4表達對肝內膽管細胞癌細胞侵襲轉移的影響及其與MMP2的關系
　　目的:研究Capn4與肝內膽管細胞癌細胞侵襲轉移能力及MMP2的關系。
　　方法:應用RNA干擾的方法下調Capn4在肝內膽管細胞癌細胞株HCCC-9810與QBC939中的表達，經(jīng)qRT-PCR、western blot驗證抑制效率后，應用劃痕試驗檢測細胞遷移能力變化，t

8、ranswell試驗檢測細胞侵襲能力變化，MTT試驗檢測細胞增殖能力變化，并進一步研究干擾Capn4表達對MMP2表達的影響。
　　結果:RNA干擾后細胞株Capn4表達明顯下調。在HCCC-9810與QBC939中Capn4干擾組細胞侵襲遷移能力明顯減弱，增殖能力受Capn4表達水平影響較?。╬＞0.05）。MMP2表達與Capn4表達呈正相關。
　　結論:Capn4表達與肝內膽管細胞癌細胞的侵襲遷移能力及MMP2表達呈正