血小板相關(guān)因素在心血管系統(tǒng)疾病中的作用研究.pdf

1、第一部分：苯并芘促進血小板介導(dǎo)的血栓形成的機制研究
　　 目的
　　 研究香煙煙霧主成分苯并芘(BaP)對血小板介導(dǎo)的血栓形成機制的影響，篩選相關(guān)的作用靶點，并在模式動物(小鼠)中驗證相關(guān)效應(yīng)。
　　 方法
　　 1.血小板聚集儀檢測BaP對不同刺激劑誘導(dǎo)的血小板聚集的影響；
　　 2.流動小室試驗檢測不同剪切率下BaP對血小板粘附的影響；
　　 3.WesternBlot檢測BaP對血小

2、板活化信號通路靶點蛋白的作用，并通過相應(yīng)的抑制劑進行驗證；流式細(xì)胞儀檢測BaP對不同刺激劑誘導(dǎo)的血小板活化因子(P選擇素，fibrinogenbinding等)表達(dá)的檢測。
　　 4.利用C57BL/6J野生型小鼠構(gòu)造急性血栓模型，驗證BaP對急性心血管血栓形成的作用。
　　 結(jié)果
　　 1.BaP對ADP介導(dǎo)的血小板聚集有顯著的促進作用，但對凝血酶，膠原誘導(dǎo)的血小板聚集無明顯的協(xié)同作用；
　　 2.Ba

3、P在1000S-1的剪切率誘導(dǎo)下(模擬動脈血流剪切率)，可顯著增強血小板的粘附；
　　 3.Westernblotting篩選BaP作用于ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的信號通路靶點蛋白，發(fā)現(xiàn)P38MAPK蛋白的磷酸化顯著上調(diào)，同時BaP的促進作用可以被P38MAPK抑制劑SB203580所阻斷，但對其他ADP下游的信號蛋白ERK，AKT，Src等蛋白的活化無顯著影響；
　　 4.流式細(xì)胞儀檢測顯示BaP對血小板P選擇素，fib

4、rinogenbinding的表達(dá)有顯著的促進作用；
　　 5.BaP在氯化鐵誘導(dǎo)的急性血栓模型(野生型的C57BL/6J小鼠)中，能顯著地縮短血栓形成時間，并且形成穩(wěn)定的血栓無復(fù)流狀態(tài)；
　　 結(jié)論
　　 1.BaP對體外ADP誘導(dǎo)的血小板聚集，活化，粘附均有顯著的促進作用，該作用可能部分通過影響ADP通路下游的P38MAPK磷酸化上調(diào)來實現(xiàn)；
　　 2.BaP對急性血栓模型有明顯的促進作用，使血栓形成

5、時間縮短且穩(wěn)固。
　　 第二部分：血小板功能相關(guān)標(biāo)記物對冠心病患者的預(yù)測價值研究
　　 目的
　　 對心血管常規(guī)的血小板功能相關(guān)標(biāo)記物進行篩選，對相應(yīng)的冠心病人群進行隨訪，以找到對冠心病患者短期或長期預(yù)后具備獨立預(yù)測價值，有效且可行的預(yù)測因子。
　　 方法
　　 納入臨床尚存在爭議或未經(jīng)研究的血小板相關(guān)標(biāo)記物3個(入院血小板數(shù)，血纖維蛋白原水平，淋巴細(xì)胞百分比)，各自確定冠心病患者組，健康志愿者對

6、照進行長期隨訪，并聯(lián)系同期國外主持類似研究的合作者進行數(shù)據(jù)合并，盡可能擴大樣本驗證結(jié)果，通過logistic回歸分析，多元回歸分析以及meta分析，篩選急性冠脈綜合征患者的獨立預(yù)測因子。
　　 結(jié)果
　　 1.高入院血小板數(shù)(＞350×109/L)對急性冠脈綜合征患者的長期死亡率和不良心臟事件發(fā)生率(MACE)有獨立預(yù)測作用，無論是短期還是長期隨訪，入院血小板數(shù)和急性冠脈綜合征患者死亡率，MACE發(fā)生率均成U型量效關(guān)系。

7、
　　 2.入院血纖維蛋白原在急性冠脈綜合征患者中的表達(dá)顯著高于穩(wěn)定性心臟病患者及健康對照組(P＜0.01)，血纖維蛋白原的高表達(dá)(＞350mg/dl)對急性冠脈綜合征患者的短期預(yù)后(1月)和長期預(yù)后(2年)均有顯著的獨立預(yù)測作用。
　　 3.淋巴細(xì)胞百分比的低表達(dá)(＜20％)對急性冠脈綜合征患者的長期MACE有獨立的預(yù)測價值。
　　 結(jié)論
　　 篩選出3個在心血管臨床切實可行且有效的預(yù)測因子：入院血小板

8、數(shù)，血纖維蛋白原水平，血淋巴細(xì)胞百分比，并確定了他們與急性冠脈綜合征患者預(yù)后的相關(guān)性，對臨床預(yù)后相關(guān)因子的篩選和評分做了補充。
　　 第三部分：抗血小板藥物阿昔單抗對糖尿病冠心病患者的療效研究
　　 目的
　　 探討合并糖尿病的冠心病患者在接受介入(PCI)手術(shù)時，在已服用噻吩并吡啶藥物(氯吡格雷)負(fù)荷劑量的前提下，是否有必要加用阿昔單抗灌注的抗血小板治療來改善其預(yù)后。
　　 方法
　　 搜索Me

9、dline，Embase，Cochranedatabase，ISI和CNKI數(shù)據(jù)庫，同時聯(lián)系慕尼黑心臟中心的Dr.Kastrati和Dr.Mehilli教授，獲得ISAR-SWEET，ISAR-REACT，ISAR-REACT2和BRAVE-3四個臨床試驗的糖尿病亞組人群的原始數(shù)據(jù)，進一步分析在都接受氯吡格雷負(fù)荷劑量的患者中，聯(lián)用阿昔單抗組和對照組之間短期，長期預(yù)后的差異(包括死亡率，血管再狹窄率，MACE及出血副作用)。
　　

10、 結(jié)果
　　 對2607個糖尿病冠心病患者的研究結(jié)果顯示，無論對接受擇期PCI的穩(wěn)定性冠心病患者，還是接受直接PCI的急性冠脈綜合征患者，在已接受噻吩并吡啶藥物(氯吡格雷)負(fù)荷劑量的前提下，聯(lián)用阿昔單抗無顯著作用：穩(wěn)定性冠心病患者：RR1-month：0.93，95％CI：0.60-1.44；RR1-year：0.95，95％CI：0.81-1.11；急性冠脈綜合征患者：RR1-month：1.05，95％CI：0.70-1.5

11、7；RR1-year：0.98，95％CI：0.80-1.21)。在以上人群中，死亡率，再發(fā)心梗率，血管再狹窄率也無明細(xì)改善。唯一可能帶來的好處是改善穩(wěn)定性冠心病患者的一年靶病變血運重建率(TLR)。安全性方面，盡管大出血風(fēng)險與對照組相似(RR：0.83，95％CI：0.27-2.57)，阿昔單抗的灌注甚至可能帶來更高的小出血風(fēng)險(RR：2.94，95％CI：1.68-5.13，P＜0.001)。
　　 結(jié)論
　　 聯(lián)用