腫瘤壞死因子信號傳導及其旁路在小鼠肝癌細胞凋亡過程中作用及其機制的研究.pdf

1、華中科技大學博士學位論文腫瘤壞死因子信號傳導及其旁路在小鼠肝癌細胞凋亡過程中作用及其機制的研究姓名：侍作亮申請學位級別：博士專業(yè)：外科學（普通外科）指導教師：陳孝平20060401華中科技大學同濟醫(yī)學院博士學位論文2006凋亡的。1985年克隆了TNF并于大腸桿菌中表達為詳細的研究腫瘤壞死因子對腫瘤細胞的作用和生物學特性提供方便。隨后一年科研機構(gòu)和藥學企業(yè)進行了大量的動物實驗研究證明了TNF對各種各樣癌癥的有效性，對小鼠模型和人體腫瘤異

2、種移植的裸鼠進行瘤內(nèi)應用TNF有效地使腫瘤消退。然而，僅當全身給藥才能夠殺死轉(zhuǎn)移到機體遠處區(qū)域的腫瘤細胞或有助于根除亞臨床轉(zhuǎn)移灶。不辛的是，全身性給藥在小鼠鮮有效果，這可能由于腫瘤多樣性所造成。盡管在過去幾年，已詳細描述了細胞死亡的信號傳導通路，但某些腫瘤細胞為什么能夠抵抗TNF的細胞毒性作用仍不清楚。細胞內(nèi)信號傳導過程是一個復雜的網(wǎng)絡(luò)級聯(lián)，TNF既能誘導細胞凋亡，又能激活抗細胞凋亡的轉(zhuǎn)錄因子NF—KB。此外，TNF是否還通過其信號傳導

3、的網(wǎng)絡(luò)結(jié)點TRAF2，RIP等激活細胞內(nèi)其它細胞因子(如PKC，AKT等)，這些細胞因子是如何影響TNF細胞內(nèi)信號傳導過程都有待進一步的研究，探討TNF作用于細胞后細胞內(nèi)信號傳導的分子機制以及細胞的生命狀態(tài)可以為TNF的臨床研究和應用提供分子理論基礎(chǔ)。研究證實，TNF—n通過其信號傳導的網(wǎng)絡(luò)節(jié)點TRAF2激活JNK激酶和P38，然而，JNK和P38在TNF—a信號傳導過程中的作用目前尚存爭議。我們通過不同濃度TNF—a作用于H22細胞后

4、，于不同時間以流式細胞儀檢測細胞凋亡，以westernblot檢測JNK，P38和caspase一8的表達。發(fā)現(xiàn)細胞凋亡率的高低與JNK，P38及caspase一8表達及活性水平一致，當以sp600125抑制JNK活性或SB203580抑制P38活性，細胞凋亡率顯著下降，其下降水平與caspase一8表達下調(diào)水平一致。實驗結(jié)果表明，JNK和P38信號傳導通路在TNFa信號傳導過程中呈現(xiàn)出顯著的促調(diào)亡作用，同時發(fā)現(xiàn)P38表達水平與活性對J

5、NK表達及活化呈正性調(diào)節(jié)作用。盡管JNK和P38在TNF一Ⅱ信號傳導通路中顯著上調(diào)并呈現(xiàn)出促凋亡作用，但H22細胞對TNF—Q細胞毒性并不敏感，TNFQ濃度達到60ng／m1作用于H22細胞8h，細胞凋亡率與對照組比較才有統(tǒng)計學差異。這個濃度遠遠超過人體耐受的極限濃度，那么為何H22細胞對TNFa不敏感文獻資料顯示，TNF—a不僅通過NF—KB拮抗細胞凋亡，而且通過復雜的細胞內(nèi)信號級聯(lián)，參與調(diào)節(jié)PKC—a的表達及其活性，而PKC—n具有