膿毒癥大鼠腫瘤壞死因子α與心肌細(xì)胞凋亡的關(guān)系及其機(jī)制探討.pdf_第1頁
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1、目的:通過對(duì)凋亡效應(yīng)分子Caspase—3及抗凋亡蛋白BcL—2在膿毒癥大鼠心肌細(xì)胞表達(dá)變化的觀察,以及炎癥介質(zhì)TNF-α與心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)AI的相關(guān)性分析,探討膿毒癥時(shí)TNF-α在心肌細(xì)胞凋亡中的作用,并給予腫瘤壞死因子單克隆抗體進(jìn)行干預(yù),證明TNF-α與心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)AI的因果關(guān)系。 方法:將72只wistar雄性大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(n=24)、實(shí)驗(yàn)組(n=24)、干預(yù)組(n=24),各組又分3h、12h、24h、36h4

2、個(gè)亞組。實(shí)驗(yàn)組采用盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)法復(fù)制膿毒癥模型,對(duì)照組行假手術(shù),除不做盲腸結(jié)扎穿孔外,余同實(shí)驗(yàn)組,干預(yù)組于術(shù)前30min腹腔注射0.2mg/kg溶于0.9%氯化鈉溶液1ml腫瘤壞死因子α單克隆抗體(anti-TNFα—mAb)。通過ELISA檢測(cè)心肌組織TNF-α,TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)、免疫印跡法檢測(cè)Caspase—3及bcl—2水平的變化。 結(jié)果:①光鏡下正常對(duì)照組:未見明顯的病理改變,心肌纖維排

3、列規(guī)則,結(jié)構(gòu)清晰。實(shí)驗(yàn)組大鼠隨著時(shí)間的延長,心肌逐漸出現(xiàn)病理改變,心肌組織紊亂,血管充血出血,心肌細(xì)胞間見成堆血細(xì)胞,尤以36h最明顯,心肌細(xì)胞腫脹或皺縮,胞核變形。干預(yù)組心肌組織紊亂,可見有出血點(diǎn),較同時(shí)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組相比病理變化減輕,細(xì)胞核未見明顯變化。②CLP術(shù)后心肌組織TNFα呈持續(xù)升高,與對(duì)照組相比有顯著差異(P<0.01),36hTNF-α水平達(dá)高峰,但24h和36h TNF-α水平無顯著差異(P>0.05),干預(yù)組TNF-α水平

4、較膿毒癥組均顯著下降,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③CLP術(shù)后心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)呈進(jìn)行性增加,與對(duì)照組相比有顯著差異(P<0.01),36h達(dá)高峰,但24h和36h相比無顯著差異(P>0.05),干預(yù)組心肌細(xì)胞凋亡數(shù)較實(shí)驗(yàn)組均顯著下降,有顯著差異(P<0.01)。④相同時(shí)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組和干預(yù)組大鼠心肌組織Caspase—3均高于對(duì)照組(P<0.01),且實(shí)驗(yàn)組Caspase—3水平均高于同時(shí)點(diǎn)干預(yù)組(P<0.01),相同時(shí)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組和干預(yù)組大鼠心肌bcl—

5、2均低于對(duì)照組(P<0.01),干預(yù)組bcl—2水平高于實(shí)驗(yàn)組(P<0.01)。⑤大鼠心肌組織TNF-α與心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)之間存在正相關(guān)。 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)采用盲腸結(jié)扎穿孔法制作膿毒癥模型,在結(jié)扎術(shù)后3h大鼠即開始出現(xiàn)大鼠一般狀態(tài)、白細(xì)胞等的改變,符合膿毒癥的特點(diǎn),可證明膿毒癥模型復(fù)制成功。通過對(duì)caspase—3、bcl—2及TNF-α的研究發(fā)現(xiàn),膿毒癥的發(fā)展過程中,心肌細(xì)胞凋亡逐漸增加,凋亡指數(shù)與TNF-α成正相關(guān),說明

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