膿毒癥大鼠JAK-STAT信號通路活化及其與腫瘤壞死因子-α表達的關(guān)系.pdf

1、目的:該實驗采用大鼠CLP模型動態(tài)觀察膿毒癥動物主要臟器TNF-α mRNA和蛋白表達的特點及JAK/STAT信號通路對其表達的影響,初步探討G-菌膿毒癥時TNF-α誘生的信號調(diào)控機制;闡明JAK/STAT信號通路與TNF-α表達的相互關(guān)系及其在膿毒癥所致多器官功能損害發(fā)病過程中的作用,旨在為進一步探索膿毒癥的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制和防治途徑提供新的思路.方法:雄性Wistar大鼠140只,隨機分為8組:(1)正常對照組(n=10),動物于麻醉后

2、活殺;(2)假手術(shù)對照組(n=10),動物于開關(guān)腹腔手術(shù)后2h活殺;(3)盲腸結(jié)扎穿孔組(n=60):按時間點分別于CLP后0.5、2、6、12、24和48h活殺動物;(4)AG490(JAK2激酶抑制劑)組(n=24):CLP前20mins皮下注射AG490 8.0 mg/kg,然后于CLP后2、6、24和48h活殺;(5)RPM(rapamycin,STAT抑制劑)組(n=24):CLP前20mins皮下注射注射RPM 0.4 mg

3、/kg,并于CLP后2、6、24和48h活殺.(6)DMSO(二甲基亞砜,試劑的溶質(zhì))組(n=12):開關(guān)腹腔手術(shù)前20mins皮下注射DMSO 4.0 ml/kg,于開關(guān)腹腔術(shù)后2和24h活殺.經(jīng)腹主動脈采血,分離血標(biāo)本用于測定血清生化指標(biāo).無菌留取動物肝、肺組織經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)進行TNF-αmRNA表達的檢測.TNF-α蛋白水平經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法檢測.血清ALT、AST、BUN、Cr等使用717

4、0自動生化分析儀測定;肺組織髓過氧化物酶(MPO)活性采用酶學(xué)分光光度法測定;小腸組織二胺氧化酶(DAO)活性采用分光光度法測定.結(jié)論:1.嚴(yán)重腹腔感染可明顯上調(diào)膿毒癥動物機體肝、肺組織"早期"介質(zhì)--TNF-αmRNA和蛋白的表達,局部組織TNF-α高表達與感染后多器官功能損害的發(fā)病過程有關(guān).2.阻斷JAK/STAT途徑可明顯下調(diào)組織TNF-α的表達,以肝、肺尤為顯著.表明JAK/STAT信號通路參與了膿毒癥大鼠TNF-α表達的調(diào)控過