肝癌個體化治療的基礎(chǔ)與臨床研究.pdf

1、研究背景:
　　肝細(xì)胞肝癌（肝癌）是一種高度惡性的肝臟腫瘤，影響患者預(yù)后的主要因素是術(shù)后復(fù)發(fā)。目前microRNA的研究表明其在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用，參與了多條腫瘤相關(guān)的信號傳導(dǎo)通路，而相關(guān)表達(dá)譜的研究也提示microRNA可以作為腫瘤診斷、預(yù)后評估的分子標(biāo)記物。本研究擬通過用芯片研究microRNA在不同復(fù)發(fā)情況的肝癌患者肝癌組織中的差異表達(dá)，并研究下游靶基因的功能與參與的信號傳導(dǎo)通路。研究肝癌惡性度相關(guān)的新micr

2、oRNA在肝癌組織中的差異表達(dá)，探索新microRNA在肝癌發(fā)生中的作用機(jī)制，尋找肝癌早期復(fù)發(fā)的標(biāo)記物。
　　另一方面，肝癌異質(zhì)性較高，肝癌患者對化療藥物的敏感性個體差異較大，而肝癌治療尚缺乏統(tǒng)一而有效的術(shù)后輔助治療方案，個體化治療可能提高肝癌患者術(shù)后治療的療效。目前關(guān)于肝癌個體化治療的研究比較有限。本研究擬通過3D組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，建立監(jiān)測肝癌患者化療藥物個體敏感性的實驗體系。
　　目的:
　　發(fā)現(xiàn)肝癌復(fù)發(fā)相關(guān)的mi

3、croRNA。
　　發(fā)現(xiàn)肝癌預(yù)后評估的標(biāo)記物。
　　探索肝癌復(fù)發(fā)相關(guān)的發(fā)生機(jī)制。
　　建立肝癌個體化治療敏感性檢測體系。
　　方法:
　　研究一:收集肝癌早復(fù)發(fā)/晚復(fù)發(fā)患者的肝癌組織樣本，運(yùn)用芯片技術(shù)進(jìn)行分析，尋找差異表達(dá)的microRNA，并用定量PCR驗證。用差異表達(dá)的microRNA對肝癌樣本進(jìn)行聚類分析。用GO功能富集分析和KEGG信號通路富集分析對差異表達(dá)的microRNA的下游靶基因進(jìn)行研究，尋

4、找與肝癌復(fù)發(fā)相關(guān)的異常細(xì)胞功能和信號傳導(dǎo)通路。通過測序方法獲得新的8條與肝癌惡性度相關(guān)的microRNA，用定量PCR方法在大樣本肝癌患者的配對癌組織/癌旁組織中驗證差異表達(dá)。
　　研究二:收集肝癌患者新鮮手術(shù)標(biāo)本，運(yùn)用3D組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，觀測不同化療藥物或組合對肝癌組織細(xì)胞遷移能力的影響。
　　結(jié)果:
　　研究一:在不同復(fù)發(fā)情況的15名肝癌患者的肝癌標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)了32條差異表達(dá)的microRNA，選擇其中4條進(jìn)行定量

5、PCR驗證。對肝癌樣本進(jìn)行聚類分析，用差異表達(dá)的microRNA可區(qū)分肝癌早復(fù)發(fā)組與晚復(fù)發(fā)組。運(yùn)用GO功能富集建立了miRNA與下游靶基因的GO功能網(wǎng)絡(luò)圖，運(yùn)用KEGG信號通路富集分析獲得了肝癌復(fù)發(fā)相關(guān)的microRNA調(diào)控的下游靶基因參與的主要信號傳導(dǎo)通路。已在兩名患者的肝癌標(biāo)本上對測序獲得的新的8條肝癌惡性度相關(guān)的microRNA進(jìn)行驗證。
　　研究二:共對6名肝癌患者進(jìn)行了研究，其中3名患者的肝癌組織標(biāo)本對表柔比星敏感，1名

6、患者的肝癌組織標(biāo)本對表柔比星和5-氟尿嘧啶均敏感，且兩藥敏感性具有顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　研究一:表明在肝癌早復(fù)發(fā)組與晚復(fù)發(fā)組的肝癌組織中microRNA表達(dá)譜存在差異，相對于晚復(fù)發(fā)組，在早復(fù)發(fā)組中miR-29c上調(diào)而miR-186、miR-15a、miR-18b下調(diào)。microRNA參與黏著斑連接、癌癥信號通路和MAPK信號通路中多個靶基因的表達(dá)調(diào)控，影響肝癌復(fù)發(fā)。差異表達(dá)的microRNA可以用于肝癌患者復(fù)發(fā)情況的