Ⅱ型cGMP依賴性蛋白激酶對(duì)胃癌細(xì)胞增殖相關(guān)MAPK-ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制作用的研究.pdf

1、研究目的：檢測(cè)Ⅱ型cGMP依賴性蛋白激酶(cGMP dependent protein kinaseⅡ,PKGⅡ)在腫瘤細(xì)胞高表達(dá)對(duì)增殖相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路MAPK/ERK的影響。研究PKGⅡ在基因調(diào)控中的作用。
　　 研究方法：
　　 (1)構(gòu)建攜帶PKGⅡ基因的腺病毒載體。
　　 (2)篩選對(duì)PKGⅡ腺病毒感染敏感的胃癌細(xì)胞，感染PKGⅡ腺病毒，以8-pCPT-cGMP特異性激活PKGⅡ，通過(guò)Western bl

2、otting方法檢測(cè)ERK、Raf和Ras蛋白活性的變化，研究PKGⅡ?qū)APK增殖相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。
　　 (3)以PKGⅡ腺病毒感染胃癌細(xì)胞BGC-823，以8-pCPT-cGMP特異性激活PKGⅡ，用mRNA差異顯示技術(shù)檢測(cè)PKGⅡ在基因調(diào)控中是否存在作用。
　　 研究結(jié)果：
　　 (1)成功構(gòu)建了攜帶PKGⅡ的腺病毒載體。
　　 (2)用PKGⅡ腺病毒感染人胃癌細(xì)胞BGC-823、AGS和S

3、GC-790l，使其PKGⅡ表達(dá)增高，并以8-pCPT-cGMP特異性激活PKGⅡ，使得EGF引起的ERK的磷酸化(活性)增高受到顯著抑制。
　　 (3)用PKGⅡ感染腺病毒人胃癌細(xì)胞BGC-823、AGS和SGC-790l，使其PKGⅡ表達(dá)增高，并以8-pCPT-cGMP特異性激活PKGⅡ，使得EGF引起的Raf的磷酸化(活性)增高受到顯著抑制。
　　 (4)用PKGⅡ腺病毒感染人胃癌細(xì)胞BGC-823和SGC-790