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1、目的:研究鉛暴露早期對(duì)大鼠視網(wǎng)膜BACE-1表達(dá)和下游產(chǎn)物Aβ產(chǎn)生的影響,探討鉛暴露早期誘導(dǎo)Aβ過量產(chǎn)生的可能分子機(jī)制。
方法:將56只成年SD大鼠隨機(jī)分鉛暴露實(shí)驗(yàn)組、溶媒對(duì)照組和正常對(duì)照組。鉛暴露實(shí)驗(yàn)組分5個(gè)小組:玻璃體內(nèi)分別注射溶解不同濃度醋酸鉛(10μmol/L、100μmol/L、1 mmol/L、10 mmol/L和100mmol/L)的PBS,溶媒對(duì)照組玻璃體注射同等體積PBS,正常組未做任何處理,每組8只。染
2、鉛48小時(shí)后,每組隨機(jī)取4只大鼠斷頸后摘取視網(wǎng)膜組織,石墨爐原子吸收光度法檢測(cè)視網(wǎng)膜鉛濃度,Western blot檢測(cè)BACE-1和β-CTF的蛋白量,ELISA檢測(cè)Aβ1-40量。每組另外4只大鼠常規(guī)灌注處死取視網(wǎng)膜采用免疫熒光化學(xué)染色檢測(cè)BACE-1,GFAP在視網(wǎng)膜的表達(dá)。
結(jié)果:
1.視網(wǎng)膜組織鉛濃度檢測(cè):在玻璃體注射不同濃度醋酸鉛48 h后除10μmol/L組外視網(wǎng)膜組織鉛濃度全部增加,呈劑量依賴
3、性改變。
2.BACE-1免疫熒光化學(xué)染色顯示正常視網(wǎng)膜BACE-1陽性產(chǎn)物主要分布于節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)網(wǎng)層、外網(wǎng)層等部位,細(xì)胞胞體未見明顯染色。隨著玻璃體腔內(nèi)注射醋酸鉛濃度的增高,視網(wǎng)膜BACE-1分布范圍未見明顯改變,蛋白表達(dá)逐漸增強(qiáng),100mmol/L組節(jié)細(xì)胞胞體出現(xiàn)BACE-1染色。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示:BACE-1條帶隨玻璃體注射醋酸鉛濃度的升高而明顯增寬、增強(qiáng),呈劑量依賴性改變。
3.β
4、-CTF(BACE-1的裂解產(chǎn)物)條帶也隨玻璃體注射醋酸鉛濃度的升高而明顯增粗、增大(10μmol/L組除外)。
4.Aβ1-40ELISA結(jié)果顯示視網(wǎng)膜組織Aβ1-40濃度除10μmol/L組外全部顯著增加,呈劑量依賴性改變。
5.GFAP免疫熒光染色:主要分布在節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)網(wǎng)層、內(nèi)核層以及外網(wǎng)層,鉛暴露實(shí)驗(yàn)組和溶媒對(duì)照組與正常對(duì)照組相比表達(dá)分布與強(qiáng)度未見有明顯改變。
結(jié)論:鉛暴露早期可導(dǎo)致視
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