Pim-3和bc1-2在人食管鱗癌組織中的表達及相關性研究.pdf

1、食管癌是一種較為常見的惡性程度極高的消化道腫瘤,是當今世界上對人類健康危害最大的惡性腫瘤之一,隨著醫(yī)療水平的提高,食管癌的治療現(xiàn)狀較過去有明顯的改善。早期食管癌的治療最好的方法仍是手術切除;中晚期食管癌的治療現(xiàn)狀并不樂觀,用局部的手術治療難以達到滿意的療效,現(xiàn)階段食管癌的主要的治療方法為放療、化療及藥物治療,但目前術后復發(fā)率仍很高,病人五年生存率仍然十分低下,難以滿足目前醫(yī)療發(fā)展的最終目標。當前興起的靶向基因治療已經(jīng)成為對放、化療效果不

2、滿意的腫瘤病人治療的一種新型的替代手段。因而從分子水平上探討食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的分子機制,找到針對抑制食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的有效的治療靶點,對食管鱗癌的臨床治療、預防以及患者生存率和生存質(zhì)量的提高都具有極其重要的意義。
　　 Pim-3最初在鼠嗜鉻細胞瘤細胞系PC12細胞中發(fā)現(xiàn),并被鑒定為誘導去極化的基因KID-1,因為KID-1與表達絲氨酸/蘇氨酸激酶活性的原癌基因Pim家族具有高度的同源性,因而命名為Pim-3。近年來研究顯示,激

3、活的Pim激酶在惡性腫瘤的發(fā)病機制中發(fā)揮重要的作用,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關系十分密切,并且在腫瘤細胞凋亡中起著重要的作用,其在腫瘤細胞中的凋亡作用機制可能是原癌基因Pim-3主要磷酸化Bad蛋白112位的絲氨酸,進一步導致bcl-XL和bcl-2釋放,阻止細胞凋亡。迄今為止,原癌基因Pim-3和抑凋亡基因bcl-2之間的相互關系在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用在國內(nèi)外尚未見報道,本研究采用RT-PCR、Western blotting、原位雜交和

4、免疫組織化學4種不同的方法聯(lián)合檢測了食管癌高發(fā)區(qū)河南安陽的食管癌患者手術切除的癌組織中原癌基因Pim-3和抑凋亡基因bcl-2 mRNA和蛋白的表達情況,分析其與臨床病理學特征的關系,進一步探討Pim-3和bcl-2在食管鱗癌組織中表達的相關性,該研究旨在為進一步探討Pim-3和bcl-2在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用及尋找檢測食管鱗癌的新的分子靶點奠定基礎。
　　 方法：
　　 1.采用半定量RT-PCR方法檢測食管鱗癌組

5、織、癌旁不典型增生組織以及正常食管粘膜上皮組織中Pim-3和bcl-2 mRNA的相對表達水平。
　　 2.采用Western blotting方法檢測食管鱗癌組織、癌旁不典型增生組織以及正常食管粘膜上皮組織中Pim-3和bcl-2蛋白的相對表達水平。
　　 3.采用原位雜交技術檢測45例食管鱗癌組織、22例癌旁不典型增生組織以及45例正常食管粘膜上皮組織中Pim-3和bcl-2 mRNA的表達,并分析其蛋白表達的相關性

6、。
　　 4.采用免疫組織化學方法檢測45例食管鱗癌組織、22例癌旁不典型增生組織以及45例正常食管粘膜上皮組織中Pim-3和bcl-2蛋白的表達,并分析其蛋白表達的相關性。
　　 5.統(tǒng)計學處理:應用SPSS13.0軟件分析,采用X2檢驗、t檢驗和方差分析以及相關性分析。P＜0.05表示具有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 1.Pim-3的半定量RT-PCR結果表明,在食管鱗癌組織中能成功擴增出500b

7、p的Pim-3基因,而在正常食管粘膜上皮組織中未見相應的條帶。食管鱗癌組織和癌旁不典型增生組織中Pim-3相對表達豐度分別為0.809±0.015和0.092±0.009,而正常組織中的表達為0,三者之間的表達具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 2.Bcl-2的半定量RT-PCR結果表明,在食管鱗癌組織中能成功擴增出595bp的bcl-2基因,而在正常食管粘膜上皮組織中未見相應的條帶。食管鱗癌組織和癌旁不典型增生組織中bcl

8、-2相對表達豐度分別為0.671±0.011和O.102±0.007,而正常組織中的表達為0,三者之間的表達具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 3.Western blotting結果表明,Pim-3和bcl-2蛋白在食管鱗癌組織中呈現(xiàn)高表達,而在正常食管粘膜組織中無表達。食管鱗癌組織中Pim-3和bcl-2蛋白的相對表達量分別為:0.796±0.018和0.757±0.014,顯著高于癌旁邊不典型增生組織中Pim-3和bc

9、l-2蛋白的相對表達(分別為:0.299±0.011和0.225±0.009),正常食管粘膜組織中Pim-3和bcl-2的相對表達為0,三者之間的表達具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 4.原位雜交結果顯示,Pim-3 mRNA主要定位于細胞質(zhì)中,呈藍紫色顆粒。Pim-3 mRNA在食管鱗癌組織中高表達,其陽性率為82.22％(37/45),顯著高于癌旁不典型增生組織和正常食管上皮組織中Pim-3 mRNA的表達,二者的陽性

10、率分別為22.73％(5/22)和0.00％(0/45),三組之間表達的差異具有統(tǒng)計學意義(x2=82.487,P＜0.05)。
　　 5.Pim-3蛋白定位于細胞胞質(zhì)中,呈淺黃色至棕黃色顆粒。Pim-3蛋白高表達于食管鱗癌組織,陽性率高達75.56％(34/45),顯著高于癌旁不典型增生組織和正常食管上皮組織中Pim-3蛋白的表達,其陽性率分別為:18.18％(4/22)和0.00％(0/45),三組之間表達的差異具有統(tǒng)計學意

11、義(x2=72.570,P＜0.05)。
　　 6.原位雜交結果顯示,bcl-2 mRNA主要定位于細胞質(zhì)中,呈藍紫色顆粒。在45例食管鱗癌組織中bcl-2 mRNA的陽性表達例數(shù)為35例,其陽性表達率為:77.78％(35/45),而在癌旁不典型增生組織為7例,其mRNA表達的陽性率為31.82％(7/22),在正常食管黏膜組織中尚未發(fā)現(xiàn)bcl-2mRNA的表達。Bcl-2 mRNA在食管鱗癌組織、癌旁不典型增生組織和正常食管

12、黏膜組織中的陽性表達率比較差異具有統(tǒng)計學意義(x2=58.451,P＜0.05)。
　　 7.Bcl-2蛋白陽性染色定位于細胞胞質(zhì)中,呈淺黃色至棕黃色顆粒。免疫組化檢測結果表明,在45例食管鱗癌組織中bcl-2蛋白的陽性表達例數(shù)為32例,其陽性表達率為:71.11％(32/45),而在癌旁不典型增生組織為5例,其表達的陽性率為22.72％(5/22),在正常食管黏膜組織中尚未發(fā)現(xiàn)bcl-2蛋白的表達。Bcl-2蛋白在食管鱗癌組織

13、、癌旁不典型增生組織和正常食管黏膜組織中的陽性表達率比較差異具有統(tǒng)計學意義(x2=52.724,P＜0.05)。
　　 8.利用SPSS13.0統(tǒng)計學處理軟件分析Pim-3 mRNA表達與食管鱗癌臨床病理學特征的關系。結果表明,Pim-3 mRNA表達與淋巴結轉移和TNM分期具有明顯的相關性(P＜0.05),但與組織學分級、浸潤深度無關(P＞0.05)。
　　 9.Pim-3和bcl-2的相關性分析結果表明,在45例食管

14、鱗癌組織中,Pim-3蛋白陽性表達34例中,其bcl-2蛋白陽性表達占30例,而Pim-3蛋白陰性表達的11病例中,其bcl-2蛋白陰性表達占9例。Pim-3和bcl-2在食管鱗癌組織中的表達強度呈正相關關系(γp=0.664,P=0.000)。
　　 結論：
　　 1.食管鱗癌組織中Pim-3和bcl-2均呈現(xiàn)高表達,而正常食管黏膜上皮組織中Pim-3和bcl-2的表達均缺失。
　　 2.食管鱗癌組織中Pim-