Pim-3在肺腺癌A549細(xì)胞及中醫(yī)不同證型肺癌組織中的表達(dá).pdf

1、[目的]
　　 運(yùn)用免疫組化法，檢測Pim-3蛋白在肺腺癌A549細(xì)胞系和不同中醫(yī)辨證分型、組織類型肺癌組織中的表達(dá)，討論其臨床意義。
　　 [方法]
　　 1.標(biāo)本搜集:搜集保存于湖北省十堰市太和醫(yī)院病理科的肺癌組織、癌周組織及支氣管擴(kuò)張組織共27例術(shù)后石蠟包埋標(biāo)本，肺癌、支氣管擴(kuò)張依據(jù)人民衛(wèi)生出版社出版的《內(nèi)科學(xué)》第七版教材的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)確診。按組織類型分組，其中非肺癌支氣管肺組織（支氣管擴(kuò)張組織）6例，不同

2、組織類型的肺癌組織共21例（包括腺癌、鱗癌、小細(xì)胞癌各7例），每例標(biāo)本切片2張;并搜集體外培養(yǎng)的肺腺癌A549細(xì)胞。癌周組織取材于距離患者腫瘤病灶2-5 cm的支氣管肺組織。結(jié)合中醫(yī)關(guān)于肺癌的相關(guān)辨證分型標(biāo)準(zhǔn)及患者臨床癥狀特征，對21例肺癌病例進(jìn)行中醫(yī)辨證分型，其中包括氣陰兩虛型8例，陰虛內(nèi)熱型8例，痰濁壅肺型5例。
　　 2.實驗分組:①按照細(xì)胞、組織類型分組:分為A549細(xì)胞組、支氣管擴(kuò)張組、肺腺癌組、肺鱗癌組、肺小細(xì)胞癌組

3、、癌周組織組。②按照中醫(yī)辨證分型:分為氣陰兩虛型、陰虛內(nèi)熱型、痰濁壅肺型。
　　 3.實驗方法:各組實驗標(biāo)本，經(jīng)脫蠟處理后運(yùn)用免疫組化法染色，分別檢測細(xì)胞內(nèi)Pim-3蛋白的表達(dá)。Pim-3陽性表達(dá)為細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)密集均勻黃染。由3名醫(yī)師分別進(jìn)行雙盲閱片，對鏡下陽性細(xì)胞百分率及染色強(qiáng)度進(jìn)行評分。①陽性細(xì)胞百分率:每張切片隨機(jī)選取5個高倍視野(×400)，記數(shù)視野內(nèi)陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)及總細(xì)胞數(shù)的百分率，陽性細(xì)胞數(shù)＜5％為0分，5％-25

4、％為1分，26％-50％為2分，51％-75％為3分，76％-100％為4分。②陽性著色強(qiáng)度:細(xì)胞胞漿無黃染為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分。③將兩者分值相乘，并計算各組評分均值，小于1分為陰性（-），1-4分為弱陽性(+)，5-8分為陽性(++)。各組間差異用方差分析（F檢驗）比較，spss17.0軟件計算p值，分析A549細(xì)胞、不同組織類型及不同中醫(yī)證型肺癌組織、支氣管擴(kuò)張組織、癌周組織之間Pim-3的表達(dá)差異。
　　 [

5、結(jié)果]
　　 1.使用免疫組化染色后，在A549細(xì)胞中，A549細(xì)胞組為陽性表達(dá)，而A549細(xì)胞陰性對照組為陰性表達(dá)。兩者Pim-3表達(dá)存在顯著差異，p＜0.05，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義。說明Pim-3在肺腺癌A549細(xì)胞中呈陽性表達(dá)。
　　 2.6例支氣管擴(kuò)張術(shù)后標(biāo)本，共12張切片進(jìn)行免疫組化染色檢測后，其中的肺泡上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及支氣管柱狀上皮細(xì)胞的Pim-3表達(dá)均為陰性。三者Pim-3表達(dá)無明顯差異，

6、p＞0.05，三者間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。說明Pim-3在非肺癌支氣管-肺組織中表達(dá)為陰性。
　　 3.在腺癌7例、鱗癌7例、小細(xì)胞癌7例標(biāo)本，每組14張切片中，不同組織類型的癌組織細(xì)胞，Pim-3均為陽性表達(dá)，三組間Pim-3表達(dá)無明顯差異，p值0.05，三者間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（表6）。說明Pim-3在不同組織類型肺癌都呈陽性表達(dá)，且相互間無明顯的表達(dá)差異。而在癌周組織，Pim-3表達(dá)評分為0.33±0.58，呈陰性表達(dá)。

7、r>　　 4.在肺癌氣陰兩虛型8例、陰虛內(nèi)熱型8例、痰濁壅肺型5例標(biāo)本，每組14張切片中，不同中醫(yī)證型的癌組織細(xì)胞，Pim-3均為陽性表達(dá)，三組間Pim-3表達(dá)無明顯差異，p值＞0.05，三者間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。說明Pim-3在不同中醫(yī)證型肺癌都呈陽性表達(dá)，且相互間無明顯的表達(dá)差異。
　　 [結(jié)論]
　　 應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測后，Pim-3在A549細(xì)胞、肺癌組織中都呈陽性表達(dá)，而在癌周組織及非肺癌支氣管-肺組織中不

8、表達(dá)。Pim-3這種在肺癌組織中的特異性的高表達(dá)，可以將肺癌組織與癌周組織、非肺癌支氣管肺組織區(qū)分開來。這提示了Pim-3蛋白可能是肺癌在發(fā)生發(fā)展過程中的特異性生物標(biāo)志物，該標(biāo)志物的檢測，可能應(yīng)用于肺癌的臨床診斷。
　　 同時，在對不同組織類型及不同中醫(yī)辨證分型的肺癌組織進(jìn)行組間比較后，并未發(fā)現(xiàn)明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。因此，雖然Pim-3可能應(yīng)用于肺癌的臨床診斷，但并不能憑借檢測結(jié)果區(qū)分肺癌的組織學(xué)類型。
　　 但是，本實驗并