Pim-3在肺腺癌A549細胞及中醫(yī)不同證型肺癌組織中的表達.pdf

1、[目的]
　　 運用免疫組化法，檢測Pim-3蛋白在肺腺癌A549細胞系和不同中醫(yī)辨證分型、組織類型肺癌組織中的表達，討論其臨床意義。
　　 [方法]
　　 1.標(biāo)本搜集:搜集保存于湖北省十堰市太和醫(yī)院病理科的肺癌組織、癌周組織及支氣管擴張組織共27例術(shù)后石蠟包埋標(biāo)本，肺癌、支氣管擴張依據(jù)人民衛(wèi)生出版社出版的《內(nèi)科學(xué)》第七版教材的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)確診。按組織類型分組，其中非肺癌支氣管肺組織（支氣管擴張組織）6例，不同

2、組織類型的肺癌組織共21例（包括腺癌、鱗癌、小細胞癌各7例），每例標(biāo)本切片2張;并搜集體外培養(yǎng)的肺腺癌A549細胞。癌周組織取材于距離患者腫瘤病灶2-5 cm的支氣管肺組織。結(jié)合中醫(yī)關(guān)于肺癌的相關(guān)辨證分型標(biāo)準(zhǔn)及患者臨床癥狀特征，對21例肺癌病例進行中醫(yī)辨證分型，其中包括氣陰兩虛型8例，陰虛內(nèi)熱型8例，痰濁壅肺型5例。
　　 2.實驗分組:①按照細胞、組織類型分組:分為A549細胞組、支氣管擴張組、肺腺癌組、肺鱗癌組、肺小細胞癌組

3、、癌周組織組。②按照中醫(yī)辨證分型:分為氣陰兩虛型、陰虛內(nèi)熱型、痰濁壅肺型。
　　 3.實驗方法:各組實驗標(biāo)本，經(jīng)脫蠟處理后運用免疫組化法染色，分別檢測細胞內(nèi)Pim-3蛋白的表達。Pim-3陽性表達為細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)密集均勻黃染。由3名醫(yī)師分別進行雙盲閱片，對鏡下陽性細胞百分率及染色強度進行評分。①陽性細胞百分率:每張切片隨機選取5個高倍視野(×400)，記數(shù)視野內(nèi)陽性表達細胞數(shù)及總細胞數(shù)的百分率，陽性細胞數(shù)＜5％為0分，5％-25

4、％為1分，26％-50％為2分，51％-75％為3分，76％-100％為4分。②陽性著色強度:細胞胞漿無黃染為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分。③將兩者分值相乘，并計算各組評分均值，小于1分為陰性（-），1-4分為弱陽性(+)，5-8分為陽性(++)。各組間差異用方差分析（F檢驗）比較，spss17.0軟件計算p值，分析A549細胞、不同組織類型及不同中醫(yī)證型肺癌組織、支氣管擴張組織、癌周組織之間Pim-3的表達差異。
　　 [

5、結(jié)果]
　　 1.使用免疫組化染色后，在A549細胞中，A549細胞組為陽性表達，而A549細胞陰性對照組為陰性表達。兩者Pim-3表達存在顯著差異，p＜0.05，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義。說明Pim-3在肺腺癌A549細胞中呈陽性表達。
　　 2.6例支氣管擴張術(shù)后標(biāo)本，共12張切片進行免疫組化染色檢測后，其中的肺泡上皮細胞、平滑肌細胞、血管內(nèi)皮細胞及支氣管柱狀上皮細胞的Pim-3表達均為陰性。三者Pim-3表達無明顯差異，

6、p＞0.05，三者間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。說明Pim-3在非肺癌支氣管-肺組織中表達為陰性。
　　 3.在腺癌7例、鱗癌7例、小細胞癌7例標(biāo)本，每組14張切片中，不同組織類型的癌組織細胞，Pim-3均為陽性表達，三組間Pim-3表達無明顯差異，p值0.05，三者間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（表6）。說明Pim-3在不同組織類型肺癌都呈陽性表達，且相互間無明顯的表達差異。而在癌周組織，Pim-3表達評分為0.33±0.58，呈陰性表達。

7、r>　　 4.在肺癌氣陰兩虛型8例、陰虛內(nèi)熱型8例、痰濁壅肺型5例標(biāo)本，每組14張切片中，不同中醫(yī)證型的癌組織細胞，Pim-3均為陽性表達，三組間Pim-3表達無明顯差異，p值＞0.05，三者間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。說明Pim-3在不同中醫(yī)證型肺癌都呈陽性表達，且相互間無明顯的表達差異。
　　 [結(jié)論]
　　 應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測后，Pim-3在A549細胞、肺癌組織中都呈陽性表達，而在癌周組織及非肺癌支氣管-肺組織中不

8、表達。Pim-3這種在肺癌組織中的特異性的高表達，可以將肺癌組織與癌周組織、非肺癌支氣管肺組織區(qū)分開來。這提示了Pim-3蛋白可能是肺癌在發(fā)生發(fā)展過程中的特異性生物標(biāo)志物，該標(biāo)志物的檢測，可能應(yīng)用于肺癌的臨床診斷。
　　 同時，在對不同組織類型及不同中醫(yī)辨證分型的肺癌組織進行組間比較后，并未發(fā)現(xiàn)明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。因此，雖然Pim-3可能應(yīng)用于肺癌的臨床診斷，但并不能憑借檢測結(jié)果區(qū)分肺癌的組織學(xué)類型。
　　 但是，本實驗并