重組逆病毒載體介導HSVtk自殺基因的調控性研究及在乳腺癌基因治療中的應用.pdf

1、中南大學博士學位論文重組逆病毒載體介導HSVtk自殺基因的調控性研究及在乳腺癌基因治療中的應用姓名：曾趙軍申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：胡維新20040501博士學位論文中文摘要GCV轉變成為一一種有毒的代謝產物，從而殺死乳腺癌細胞。用MCF／TRE／HSVtk／TetOn細胞接種SCID小鼠建立人乳腺癌SCID小鼠模型，Dox誘導7天腹腔內注射GCV治療23天后發(fā)現(xiàn)：與對照組比較乳腺癌SCID小鼠經DoxGCV

2、治療后，腫瘤體積明顯減小，生長受抑，組問比較有顯著性差異(P005)；HE染色發(fā)現(xiàn)治療組腫瘤有局部壞死，炎性細胞浸潤。RTPCR結果顯示Dox誘導后腫瘤組織HSVtk表達較明顯。結果顯示在Dox的誘導作用下，GCV對可調控性自殺基因乳腺癌SCID小鼠有顯著治療作用。在此基礎上，將逆轉錄病毒載體pRevTRE、pRevTRE／tk、pRevTet0n等通過微乒乓轉染法導入包裝細胞PA317中，分別以HygromycinB、G418篩選克隆

3、細胞，濃縮克隆細胞上清收集病毒。以重組逆轉錄病毒pRevTRE／tk為例在不同時間及不同丁酸鈉濃度下，檢測分析經篩選獲得陽性克隆的細胞上清有無HSVtk基因的表達及如何獲得高滴度的重組病毒液。收集以上逆轉錄病毒上清并以差速離心法濃縮病毒上清，經初步純化所得即為重組逆轉錄病毒。以重組逆轉錄病毒RevTRE／HSVtk感染宿主細胞MCF一7并經HygromycinB篩選后，進行Southern印跡雜交檢測，發(fā)現(xiàn)該重組病毒能夠將目的基因整合到