四大類原癌基因在大鼠原始卵泡啟動生長中作用的初探.pdf

1、目的:
　　 采用基因芯片技術(shù),初步探究與細胞增殖、凋亡和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有密切關(guān)系的四大類主要原癌基因在原始卵泡啟動生長中的作用。
　　 方法:
　　 (1)取出生2d的SD大鼠卵巢,分別在50ng/ml表皮生長因子(EGF)、200ng/ml生長分化因子-9(GDF-9)、10-5mol/L雌二醇(E2)、10-5mol/L孕酮(P4)的Waymouth培養(yǎng)體系中培養(yǎng),以單純Waymouth培養(yǎng)體系培養(yǎng)的大鼠卵巢為空

2、白對照,培養(yǎng)8d后,石蠟包埋切片,HE染色,觀察各級卵泡形態(tài),并統(tǒng)計分析各級正常卵泡數(shù),初步觀察不同發(fā)育階段和不同因子作用下的卵泡發(fā)育情況。
　　 (2)分別提取各組卵巢組織的總RNA,應(yīng)用Illumina大鼠RatRef-12全基因組表達譜芯片研究各組卵巢組織基因表達的差異,探討四大類原癌基因在原始卵泡正常啟動生長過程中的變化,同時分析EGF、GDF-9、E2、P4在調(diào)控原始卵泡啟動生長中的作用與四大類原癌基因的關(guān)系。

3、　　 結(jié)果:
　　 (1)經(jīng)組織形態(tài)學(xué)的比較、各級正常卵泡數(shù)量的計算,觀察到與單純Waymouth培養(yǎng)體系培養(yǎng)的大鼠卵巢相比較,在Waymouth培養(yǎng)體系中分別加入50ng/ml EGF和200ng/ml GDF-9,均能進一步促進原始卵泡的啟動生長,而在Waymouth培養(yǎng)體系中分別加入10-5mol/L E2和10-5mol/L P4,均會抑制原始卵泡的啟動生長。
　　 (2)芯片結(jié)果顯示:與新生組比較,8d空白對

4、照組有3540個基因表達發(fā)生變化,其中上調(diào)的有1638個(Diffscore值>+20),包含了7個原癌基因A2m,Egfr,Fgf7,Fgr,Myc,Neul,Thrb,下調(diào)的有1902個(Diffscore值<-20),包含了5個原癌基因Braf,Kit,Mycll,Ntrk3,Reln。與空白對照組比較,EGF組有88個基因表達上調(diào),其中包含1個原癌基因A2m,79個基因表達下調(diào),其中包含1個原癌基因Mycn；GDF-9組和P4組

5、,雖然分別有178個和121個基因發(fā)生了表達變化,但是均未發(fā)現(xiàn)表達差異的原癌基因；E2組有108個基因上調(diào),127個基因下調(diào),其中包含1個表達下調(diào)的原癌基因Mycn。
　　 結(jié)論:
　　 (1)在原始卵泡正常的啟動生長過程中,一部分原癌基因參與了該過程的調(diào)控,如:A2m,Egfr,Fgf7,Myc,Reln,Kit。
　　 (2)EGF對于原始卵泡啟動生長的促進作用可能與原癌基因A2m的表達上調(diào)有關(guān)。GDF-9、