癌源性成纖維細(xì)胞(CAFs)通過(guò)SDF-1-CXCR4信號(hào)軸對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖影響機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：研究癌源性成纖維細(xì)胞通過(guò)SDF-1/CXCR4信號(hào)軸對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響。
　　 材料和方法：收集 2010年5月至2010年8月至我院兩腺外科行手術(shù)治療的乳腺癌患者的癌組織，及正常乳腺組織，且術(shù)后病理結(jié)果證實(shí)為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的標(biāo)本8例。行原代組織培養(yǎng)后取成纖維細(xì)胞，分為癌源性成纖維細(xì)胞（CAFs）和正常組織來(lái)源的成纖維細(xì)胞（NAFs）兩組。應(yīng)用Realtime–PCR技術(shù)檢測(cè)CAF，NAF的SDF-1的mRNA表達(dá)水

2、平，以及MCF-7和MDA-MB-231S乳腺癌細(xì)胞CXCR4的mRNA表達(dá)水平。比較CAFs和NAFs的SDF-1的mRNA表達(dá)量的差異及MCF-7和MDA-MB-231S乳腺癌細(xì)胞CXCR4的mRNA表達(dá)量的差異。采用三維膠原–凝膠的原代細(xì)胞培養(yǎng)體系，分為對(duì)照組1（MCF-7乳腺癌細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)）、對(duì)照組2（MCF-7乳腺癌細(xì)胞+NAFs共培養(yǎng)）對(duì)照組3（MDA-MB-231S細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)）實(shí)驗(yàn)組1（MCF-7乳腺癌細(xì)胞＋CAFs共培

3、養(yǎng)）、實(shí)驗(yàn)組2（MCF-7乳腺癌細(xì)胞＋CAFs＋抗SDF1單抗共培養(yǎng)）實(shí)驗(yàn)組3（MDA-MB-231S細(xì)胞+CAFs）其中每組CAFs和NAFs細(xì)胞數(shù)都為50000個(gè)，MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞數(shù)數(shù)分別為500,1000,2000,4000,8000,16000.計(jì)算各個(gè)組的MCF-7細(xì)胞克隆數(shù)，計(jì)算克隆形成率。（克隆形成率=平均克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)×100％）分析各組克隆形成率的差異。
　　 結(jié)果：熒光定量Realti

4、me–PCR結(jié)果表明與NAFs相比，CAFs的SDF-1mRNA的表達(dá)量明顯增加；MCF-7與MDA-MB-231S細(xì)胞均有CXCR4mRNA的表達(dá)，且MCF-7的表達(dá)量較MDA-MB-231細(xì)胞高。瓊脂糖三維立體培養(yǎng)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組1的MCF-7的克隆形成率與對(duì)照組1和對(duì)照組2相比，明顯增加，說(shuō)明CAFs有促進(jìn)MCF-7克隆形成的作用；而實(shí)驗(yàn)組2即加入了抗SDF-1抗體的克隆形成率與實(shí)驗(yàn)組1相比明顯降低，說(shuō)明抗SDF-1抗體對(duì)CAFs有抑