Ⅱ-Ⅲ級星型細胞瘤體外誘導(dǎo)耐藥細胞——干細胞基因及耐藥基因研究.pdf

1、目的：初步探討腦膠質(zhì)瘤細胞對烷化劑類抗腫瘤藥物耐藥產(chǎn)生的機理，在誘導(dǎo)產(chǎn)生耐藥細胞的基礎(chǔ)上，探討在耐藥形成的過程中，干細胞基因與耐藥基因表達的變化，并嘗試找到兩者之間的關(guān)系，從而為個體化治療提供依據(jù)。
　　 方法：星形細胞瘤細胞由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部惠贈，使用含有100ug/ml尼莫司?。ˋCNU）的培養(yǎng)基持續(xù)培養(yǎng)5代，撤藥后得到耐藥細胞，通過CCK-8法比較藥物誘導(dǎo)前后腫瘤細胞對尼莫司汀耐受性的差異；使用CD133抗體標記，流式細胞儀

2、分析誘導(dǎo)前后CD133陽性細胞數(shù)量的變化；用實時熒光定量PCR的方法檢測干細胞基因OCT4、Sox2、Nestin，耐藥基因MGMT、MDR1以及p53基因表達量的變化；采用甲基化特異性高分辨率熱溶解法（MS-HRM）檢測MGMT基因啟動子區(qū)域甲基化水平變化。
　　 結(jié)果：在誘導(dǎo)之后，星形細胞瘤細胞在尼莫司汀中增殖活力強于對照，半數(shù)抑制濃度明顯提高，對藥物ACNU的耐受性增強；誘導(dǎo)前后的星形細胞瘤細胞中CD133陽性細胞比例分別

3、為9.74％和0.49％，CD133陽性細胞數(shù)量明顯減少；經(jīng)過藥物誘導(dǎo)后，Sox2、Nestin基因表達下調(diào)，OCT4基因的表達下調(diào)1.84倍，具有顯著差異；MGMT基因表達上調(diào)56.6倍，具有極顯著差異，MDR1基因表達量沒有變化；兩組細胞中，MGMT基因啟動子甲基化水平均無明顯變化。
　　 結(jié)論：通過大劑量烷化劑藥物ACNU短期誘導(dǎo)的方法可以獲得耐藥細胞；該方法得到的耐藥細胞中，干細胞基因的表達下降，耐藥基因MGMT的表達明