浦東地區(qū)豬關(guān)節(jié)病重要病原體檢測(cè)及其毒力基因分析.pdf

1、豬關(guān)節(jié)病通常指導(dǎo)致豬運(yùn)動(dòng)功能障礙的四肢活動(dòng)性關(guān)節(jié)疾病，是在生物學(xué)環(huán)境和力學(xué)等因素的共同作用下，關(guān)節(jié)發(fā)生的功能和結(jié)構(gòu)的一種退行性改變。病豬臨床表現(xiàn)為一個(gè)或多個(gè)關(guān)節(jié)腫脹、疼痛、運(yùn)動(dòng)障礙，部分發(fā)病豬伴有發(fā)熱等全身癥狀。研究表明，引起該病的病原主要為豬鏈球菌（Streptococcus suis，S.suis）、副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS）和丹毒絲菌（Erysipelothrix rhusiopathiae

2、E.rhusiopathiae，ER）等。該病導(dǎo)致仔豬生長(zhǎng)性能降低、飼料轉(zhuǎn)化率降低，種豬繁殖性能降低，不但影響豬場(chǎng)正常生產(chǎn)，而且增加了養(yǎng)殖成本，直接導(dǎo)致較高的死淘率，嚴(yán)重困擾著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。
　　對(duì)浦東地區(qū)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)的豬關(guān)節(jié)病發(fā)病原因進(jìn)行調(diào)查，并以調(diào)查結(jié)果為主要依據(jù)進(jìn)行權(quán)重分析，病原因素在仔豬和種豬關(guān)節(jié)病致病因素中的權(quán)重值分別為0.6140和0.4611，是引起豬關(guān)節(jié)病的主要因素。對(duì)仔豬關(guān)節(jié)病發(fā)病情況分析顯示，10～4月份為關(guān)節(jié)

3、病發(fā)病高峰，30～60日齡仔豬發(fā)病率高。后備母豬和種豬關(guān)節(jié)病發(fā)病季節(jié)性不明顯，其致病因素也更多元化。對(duì)豬關(guān)節(jié)病病原分離鑒定顯示，引起本地區(qū)豬關(guān)節(jié)病的病原菌包括鏈球菌（Streptococcus）、丹毒絲菌、副豬嗜血桿菌和葡萄球菌(Staphylococcus)。
　　為了同時(shí)檢測(cè)引起豬關(guān)節(jié)病的豬鏈球菌2型(Streptococcus suis type2，S.suis2)、HPS和丹毒絲菌，分別設(shè)計(jì)針對(duì)豬鏈球菌2型的Cps2J基因

4、，副豬嗜血桿菌的16s rRNA基因和丹毒絲菌的16s rRNA基因，設(shè)計(jì)3對(duì)特異性引物，試驗(yàn)建立了同時(shí)檢測(cè)以上三種病原的多重PCR方法，并對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)多重PCR方法的特異性和靈敏度進(jìn)行了測(cè)試，采用該方法對(duì)采自豬關(guān)節(jié)病的病料進(jìn)行檢測(cè)，從72份豬關(guān)節(jié)液樣品中檢出2株S.suis2、1株HPS和2株丹毒絲菌，檢測(cè)結(jié)果與單個(gè)PCR結(jié)果一致，試驗(yàn)結(jié)果表明，建立的多重PCR方法敏感、特異、快速，可用于豬關(guān)節(jié)病重要病原體的檢測(cè)。
　

5、　對(duì)從豬關(guān)節(jié)病病料分離到的2株S.suis2進(jìn)行毒力基因檢測(cè)，結(jié)果顯示毒力基因分布為gdh+/cps2J+/mrp+/epf+/sly+/orf2+/gapdh+,對(duì)毒力基因進(jìn)行序列分析，Cps2J、MRP基因未檢出變異，提示其高度保守，orf2、GDH、GAPDH基因存在堿基點(diǎn)突變，但突變對(duì)其編碼的氨基酸種類(lèi)無(wú)影響，與國(guó)內(nèi)外參考菌株的同源性較高。對(duì)分離到的2株丹毒絲菌進(jìn)行毒力基因檢測(cè)，所檢測(cè)毒力基因在2株菌內(nèi)均有分布為Cps-A+/C