人樹突狀細胞中WNT蛋白分泌機制的初步研究.pdf

1、樹突狀細胞(dendritic cells，DC)是體內最重要的抗原捉呈細胞，而Wnt信號通路最近被證實在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮多種調控作用，本論文是關于DC中Wnt信號通路的一些研究。本實驗從外周血中分離獲得單核細胞，體外加入細胞因子GM-CSF和IL-4誘導培養(yǎng)5天后獲得DC，然后以這種單核細胞來源的DC為研究對象，探討DC中Wnt通路成員表達分泌及其對DC功能的影響。
　　 本實驗首先通過RT-PCR的方法檢測DC中Wnt通路成員

2、的表達情況，結果顯示，在單核細胞向DC的分化過程中始終表達WNT5A配體及Wnt通路多種受體Frzl、Frz2、Frz3、Frz4、LRP6以及ROR2的mRNA，免疫熒光的結果也證實WNT5A分布在DC的整個胞漿。DC中多種Wnt通路成員的表達提示我們Wnt信號通路可能對DC的分化或功能起重要的調控作用。
　　 SB216763可以作為經(jīng)典Wnt通路（Wnt/β-catenin信號通路）的活化劑。本實驗結果顯示，體外加入10u

3、M的SB216763處理2-3 h后，能引起DC中β-catenin的積累活化，而β-catenin信號活化后能引起DC表型的成熟，DC的共刺激分子CD80、CD86及與T細胞作用的功能分子CD40表達的平均熒光強度均明顯增加，幾乎達到成熟DC的水平。但是這種DC在功能上并未成熟，炎性因子IL-1β、IL-6、IL-12 p40、TNF-a及趨化因子受體CCR7的表達遠低于LPS促成熟的DC，甚至低于對照組未成熟DC，因此屬于一種咐受型

4、的DC。
　　 另外，由于DC能分泌WNT蛋白，DC中WNT蛋白的分泌機制以及可溶性差的WNT蛋白在細胞間如何運輸，這些都沒有明確的結論。最近有研究證明，果蝎等模式生物發(fā)育過程中WNT蛋白的分泌需要Wntless和Retromer Complex的協(xié)助。為證明DC中WNT5A的分泌是否也有Wntless和Retromer Complex的參與，本實驗利用RNAi的方法干擾Wntless分子以及Retromer Complex的關