飼用抑菌活性乳酸菌共培養(yǎng)篩選、優(yōu)化及抗性分析.pdf

1、乳酸菌是動物消化道內(nèi)的有益微生物，代謝產(chǎn)生抑菌物質(zhì)，具有抗菌譜廣、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點，而且乳酸菌兼具營養(yǎng)保健的功能，是備受關(guān)注的新型飼料添加劑。
　　本研究以抑菌活性乳酸菌為研究對象，根據(jù)菌株的生長代謝特點進行共培養(yǎng)組合的篩選，獲得了適合共培養(yǎng)的高效抑菌活性的乳酸菌共培養(yǎng)組合。并優(yōu)化乳酸菌組合共培養(yǎng)代謝產(chǎn)抑菌物質(zhì)的條件，并分析了其對常規(guī)抗生素的敏感性及其與常規(guī)益生菌的拮抗性，以期開發(fā)乳酸菌作為新型飼料添加劑及其生產(chǎn)應(yīng)用提供一定的

2、參考。具體研究內(nèi)容與結(jié)果如下：
　　1、抑菌活性乳酸菌共培養(yǎng)組合的篩選
　　選取嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌測定各培養(yǎng)上清液的抑菌活性，發(fā)現(xiàn)該4株乳酸菌對大腸埃希氏菌、陰溝腸桿菌、金黃色葡萄球菌、禽致病性大腸桿、銅綠假單胞菌、糞腸球菌、甲型副傷寒沙門氏菌、雞白痢沙門氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌、禽多殺性巴氏桿菌10種病原指示菌表現(xiàn)出了不同的抑制作用，具有廣譜抑菌性。
　　在嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿

3、菌、發(fā)酵乳桿菌單獨培養(yǎng)與兩兩組合共培養(yǎng)的生長特性基礎(chǔ)上，以乳酸菌的生物量及抑菌活性為指標(biāo)，對嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌兩兩組合共培養(yǎng)及單獨培養(yǎng)的情況進行比較分析，篩選出能夠促進高產(chǎn)抑菌物質(zhì)的共培養(yǎng)乳酸菌組合。結(jié)果表明，在相同前提條件下，干酪乳桿菌與嗜酸乳桿菌共培養(yǎng)后生物量和抑菌活性均有所提高，其OD600nm值（5.667±0.045），抑菌圈直徑達（19.53±1.15）mm，故選取該組合為共培養(yǎng)復(fù)合菌。
　

4、　2、干酪乳桿菌與嗜酸乳桿菌共培養(yǎng)條件優(yōu)化
　　以干酪乳桿菌與嗜酸乳桿菌組合共培養(yǎng)上清液的抑菌活性為指標(biāo)，篩選廉價的碳源、氮源培養(yǎng)基原材料，獲取優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基。培養(yǎng)基組方：1.32％葡萄糖、0.68%蔗糖、1.5%酵母浸粉、0.5%麩皮，0.005%硫酸錳，0.02%硫酸鎂，0.05%無水乙酸鈉、0.2%磷酸氫二鉀。
　　在優(yōu)化培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，分析了培養(yǎng)時間、溫度、接種量、裝液量對干酪乳桿菌與嗜酸乳桿菌共培養(yǎng)產(chǎn)抗菌物質(zhì)的影響

5、。結(jié)果顯示，干酪乳桿菌與嗜酸乳桿菌于優(yōu)化培養(yǎng)基中，在接種量4%、裝液量40%于33℃靜置共培養(yǎng)30h后，共培養(yǎng)上清液的抑菌活性最強，其抑菌圈直徑可達24.87mm。
　　3、抑菌活性乳酸菌的抗性分析
　　乳酸菌與幾株常規(guī)使用的益生菌間的拮抗實驗表明：嗜熱鏈球菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌與釀酒酵母菌及重組AvBD9畢赤酵母菌之間均未出現(xiàn)明顯拮抗現(xiàn)象，而對枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌均產(chǎn)生了不同程度的拮抗效

6、應(yīng)。在復(fù)配使用時應(yīng)注意選擇合適的復(fù)配方式，以達到較為理想的應(yīng)用效果。該4株乳酸菌對8種常規(guī)抗生素表現(xiàn)出了不同程度的敏感性，在日常生產(chǎn)應(yīng)用中應(yīng)注意調(diào)配使用并及時補充乳酸菌活菌劑。
　　以上研究表明，經(jīng)生物量、抑菌活性變化的比較分析，篩選出一組可以進行共培養(yǎng)的廣譜高抑菌活性的干酪乳桿菌與嗜酸乳桿菌共培養(yǎng)組合。優(yōu)化獲得了干酪乳桿菌與嗜酸乳桿菌共培養(yǎng)產(chǎn)抑菌物質(zhì)的最佳條件，一定程度上降低了培養(yǎng)基的原料成本，簡化了生產(chǎn)工藝，為提高乳酸菌產(chǎn)生抑