體外培養(yǎng)人Malassez上皮剩余細(xì)胞及鑒定.pdf

1、目的：分離培養(yǎng)人牙周膜內(nèi)Malassez上皮剩余細(xì)胞，探討一種簡(jiǎn)便、原代培養(yǎng)成功率高、可重復(fù)性好的細(xì)胞培養(yǎng)方法，為進(jìn)一步在體外研究Malassez上皮剩余細(xì)胞的生物學(xué)特性及功能提供實(shí)驗(yàn)條件。
　　 方法：選取12～25歲青少年因正畸拔除的前磨牙，采用組織塊培養(yǎng)法和酶消化法進(jìn)行牙周膜細(xì)胞原代培養(yǎng)。先使用含血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞融合達(dá)50%左右時(shí)，對(duì)Malassez上皮剩余細(xì)胞進(jìn)行選擇性培養(yǎng)，按比例逐漸減少培養(yǎng)液中血清含量

2、，同時(shí)增加細(xì)胞生長(zhǎng)所需的因子，直到完全使用無(wú)血清培養(yǎng)基。采用形態(tài)學(xué)觀察、免疫組化方法鑒定其來(lái)源，并繪制生長(zhǎng)曲線。
　　 結(jié)果：⑴分離下的牙周膜，在經(jīng)過(guò)初期含血清培養(yǎng)基的組織塊培養(yǎng)后，5-16天可見(jiàn)組織塊周?chē)屑?xì)胞爬出，大部分是成纖維細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)梭形，其間有部分多角形或“鋪路石”樣細(xì)胞，為上皮細(xì)胞，胞漿均勻，輪廓清晰。⑵酶消化法培養(yǎng)的牙周膜細(xì)胞，在12小時(shí)后即有細(xì)胞的貼壁變形，2-3天后大部分細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，所得細(xì)胞大部分也是

3、成纖維細(xì)胞，含少量上皮細(xì)胞，成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征與組織塊法培養(yǎng)的相似。⑶經(jīng)過(guò)12-24天牙周膜細(xì)胞原代培養(yǎng)，細(xì)胞融合可達(dá)50%左右，加入無(wú)血清培養(yǎng)基后，可見(jiàn)成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)受到明顯抑制，其數(shù)量逐漸減少，而上皮細(xì)胞在適應(yīng)無(wú)血清環(huán)境后數(shù)量逐漸增加。⑷經(jīng)波形絲蛋白、細(xì)胞角蛋白AE1/AE3及CK14免疫組化染色鑒定，原代培養(yǎng)的細(xì)胞為上皮來(lái)源，無(wú)間充質(zhì)細(xì)胞混雜，符合人牙周膜上皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征和生物學(xué)特性。
　　 結(jié)論：①采