大麻二酚對HaCaT細胞體外增殖的抑制作用及其對IL-8、IL-10、IL-10R的影響.pdf

1、目的：檢測大麻二酚(CBD)對人永生化角質(zhì)形成細胞株HaCaT細胞體外增殖的抑制作用及CBD對HaCaT細胞IL-8、IL-10、IL-10R產(chǎn)生的影響，探討其可能的機制，為CBD臨床治療炎癥性皮膚?。ㄈ玢y屑病、扁平苔蘚）提供實驗和理論依據(jù)。
　　方法：以人永生化角質(zhì)形成細胞株HaCaT細胞為模型。采用CCK-8法檢測0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L、8.0μmol/L CBD作用于H

2、aCaT細胞24h、48h、72h后對HaCaT細胞體外增殖的抑制作用;倒置顯微鏡下觀察各實驗組細胞的形態(tài)學變化;流式細胞術檢測CBD對HaCaT細胞細胞周期的影響;半定量-逆轉錄聚合酶鏈反應法(RT-PCR)測定不同濃度CBD對HaCaT細胞IL-8、IL-10 mRNA表達的影響;Western blot方法測定不同濃度CBD對HaCaT細胞IL-10和IL-10R產(chǎn)生的影響。
　　結果：1.CCK-8比色法結果表明:在相同的

3、作用時間段，不同濃度的CBD均能抑制HaCaT細胞增殖，與對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L CBD作用HaCaT細胞48h，對細胞體外增殖的抑制率達到最佳，分別為8.49％、13.69％、20.67％、26.33％，CBD對HaCaT細胞體外增殖的抑制作用與CBD濃度呈顯著劑量依賴關系(r=0.960，P＜0.05)。2.倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn):

4、對照組的細胞排列緊密，有光澤，呈鋪路石樣;隨著CBD濃度的增加，實驗組細胞數(shù)目逐漸減少，細胞形態(tài)發(fā)生改變，逐漸變狹長，且折光度下降。3.流式細胞術檢測結果顯示:0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/LCBD組G0～G1期比例分別為(47.09±0.11)％、(49.82±0.22)％、(52.79±0.42)％、(56.87±0.10)％，S期比例分別為(48.10±0.05)％、(44.47±0.

5、10)％、(41.32±0.11)％、(35.13±0.15)％，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）;隨著CBD濃度的增加，HaCaT細胞G0～G1期細胞比例逐漸增加(r=0.985，P＜0.05)，S期細胞比例則逐漸減少(r=-0.955，P＜0.05)。統(tǒng)計分析表明HaCaT細胞周期時相的變化與CBD濃度有劑量依賴關系。4.RT-PCR檢測結果表明:不同濃度的CBD對HaCaT細胞IL-8mRNA的表達均有抑制作用，對I

6、L-10 mRNA的表達則有上調(diào)作用。0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L CBD作用HaCaT細胞48h后，IL-8/β-actin熒光強度的比值分別為0.677±0.021、0.640±0.010、0.593±0.015、0.553±0.021;IL-10/β-actin熒光強度的比值分別為0.707±0.025、0.770±0.026、0.837±0.006、0.903±0.032，與對照

7、組相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。CBD對HaCaT細胞分泌IL-10 mRNA表達的上調(diào)作用與藥物濃度呈顯著劑量依賴關系(r=0.938，(P＜0.05);HaCaT細胞中IL-8與IL-10 mRNA的表達呈顯著負相關(r=-0.965，(P＜0.05)。5.Western blot檢測結果顯示:不同濃度的CBD均可促進IL-10和IL-10R蛋白的表達。0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μm

8、ol/L CBD作用HaCaT細胞48h后，IL-10/β-actin灰度值比值分別為0.287±0.018、0.373±0.022、0.476±0.055、0.607±0.058;IL-10R/β-actin灰度值比值分別為0.281±0.039、0.421±0.047、0.508±0.018、0.611±0.015，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。且隨著CBD濃度的增加，IL-10(r=0.975，P＜0.05)、I