他莫昔芬(TAM)對(duì)乳腺癌T47D細(xì)胞雌激素受體(ER)表達(dá)與18F-氟代脫氧葡萄糖(18F-FDG)攝取的影響.pdf

1、第一部分乳腺癌T47D細(xì)胞ER的表達(dá)及TAM治療后的表達(dá)改變
　　目的：研究測(cè)定乳腺癌T47D細(xì)胞ERα和ERβ的表達(dá)及經(jīng)TAM作用后的改變情況。
　　方法：在凹形細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)接種的細(xì)胞數(shù)量為1×104個(gè)/皿，培養(yǎng)24小時(shí)后，利用免疫熒光的方法測(cè)定ERα和ERβ的表達(dá)情況。采用細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑(CCK-8)法，在96孔板內(nèi)接種的細(xì)胞數(shù)量為1×104/孔，分別測(cè)定加入不同濃度的TAM(0～1.0×10-5mol/L)

2、200μl，培養(yǎng)24h后的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，并計(jì)算TAM的半數(shù)致死劑量（IC50），用所得IC50處理細(xì)胞24h后，利用免疫熒光的方法測(cè)定ERα和ERβ的改變情況，并利用蛋白印跡（Western Blot）的方法驗(yàn)證免疫熒光法的結(jié)果。
　　結(jié)果：經(jīng)免疫熒光法測(cè)定乳腺癌T47D細(xì)胞表達(dá)ERα和ERβ。在濃度為0、1.0×10-8、1.0×10-7、1.0×10-6、1.0×10-5mol/L的TAM作用下，T47D細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率分別

3、為(9.88±3.41)%、(23.61±3.30)%、(32.76±5.99)%、(48.85±1.90)%和(64.86±2.54)%。IC50約為1.0×10-6mol/L。免疫熒光法測(cè)得TAM作用T47D細(xì)胞后ERα下調(diào)（對(duì)照組144.73±25.19，TAM組92.11±15.48）；ERβ無(wú)明顯改變（對(duì)照組248.44±6.92，TAM組247.95±7.66）。Western Blot的結(jié)果與免疫熒光結(jié)果相一致。
　

4、　結(jié)論：乳腺癌T47D細(xì)胞株同時(shí)表達(dá)ERα和ERβ兩種受體，TAM主要作用于ERα，使其表達(dá)下降，ERβ的表達(dá)無(wú)明顯改變。
　　第二部分TAM對(duì)乳腺癌T47D細(xì)胞18F-FDG攝取的影響
　　目的：研究測(cè)定乳腺癌T47D細(xì)胞經(jīng)TAM作用后對(duì)細(xì)胞攝取18F-FDG的影響及與ER表達(dá)的關(guān)系。
　　方法：采用細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑(CCK-8)法，在96孔板內(nèi)接種的細(xì)胞數(shù)量為1×104/孔，分別測(cè)定加入不同濃度的TAM(

5、0～1.0×10-5 mol/L)200μl，培養(yǎng)24h后的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。在六孔板內(nèi)接種的細(xì)胞數(shù)量為1×106/孔，分別測(cè)定加入不同濃度的TAM(0～1.0×10-5 mol/L)2ml、培養(yǎng)24h后的測(cè)定18F-FDG的細(xì)胞攝取率，并計(jì)算18F-FDG的細(xì)胞攝取抑制率。在凹形細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)接種的細(xì)胞數(shù)量為1×104個(gè)/皿，培養(yǎng)24小時(shí)后，分別加入不含任何藥物的培養(yǎng)基、含TAM濃度為1×10-6mol/L的培養(yǎng)基及與TAM量相等體積的無(wú)

6、水乙醇的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h后，利用免疫熒光的方法測(cè)定ERα和ERβ的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：TAM濃度分別為0、1.0×10-8、1.0×10-7、1.0×10-6和1.0×10-5 mol/L的情況下作用24h后，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率分別為(9.88±3.41)%、(23.61±3.30)%、(32.76±5.99)%、(48.85±1.90)%和(64.86±2.54)%。細(xì)胞18F-FDG攝取抑制率分別為(4.40±1.94)%、

7、(6.73±3.88)%、(13.00±4.93)%、(44.11±5.33)%和(61.97±8.76)%。免疫熒光法測(cè)得TAM作用T47D細(xì)胞后ERα下調(diào)（對(duì)照組178.83±15.11，TAM組111.27±18.19）；ERβ無(wú)明顯改變（對(duì)照組230.25±13.37，TAM組233.80±12.30）。
　　結(jié)論：TAM作用24h后引起乳腺癌T47D細(xì)胞的18F-FDG細(xì)胞攝取率下降，且TAM作用后ERα的表達(dá)下降與18

8、F-FDG的攝取下降呈正相關(guān)性。
　　第三部分乳腺癌T47D細(xì)胞18F-FDG攝取實(shí)驗(yàn)方法探討
　　目的：以乳腺癌T47D細(xì)胞及其與化療藥物5-氟尿嘧啶（5-FU）作用后18F-FDG的攝取改變?yōu)槔?，探討?shí)驗(yàn)方法改進(jìn)方面的意見(jiàn)。
　　方法：在不同條件下測(cè)定乳腺癌T47D細(xì)胞的18F-FDG細(xì)胞攝取率，細(xì)胞數(shù)量為1×104～5×106/孔，18F-FDG放射性活度為1.85～29.6kBq，反應(yīng)時(shí)間為20～120min，

9、葡萄糖濃度為0～11mol/L，無(wú)糖培養(yǎng)基培養(yǎng)的時(shí)間為0～12h。采用細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑(CCK-8)法分別測(cè)定加入不同劑量(0～8.0×10-6mol/L)5-FU200μl,培養(yǎng)24h后測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。測(cè)定加入不同劑量(0～8.0×10-6mol/L)5-FU2ml，培養(yǎng)24h后18F-FDG的細(xì)胞攝取率。
　　結(jié)果：當(dāng)每孔1×106個(gè)細(xì)胞、加入3.7kBq18F-FDG、葡萄糖濃度為0mol/L、作用時(shí)間為100

10、min、無(wú)糖培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)間為6h時(shí)，細(xì)胞攝取率可達(dá)到(28.07±0.45)%。加入1.0×10-6、2.0×10-6、4.0×10-6和8.0×10-6mol/L5-FU24h后，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率分別為(26.96±1.33)%、(42.94±2.25)%、(52.65±2.10)%和(60.03±4.35)%。細(xì)胞攝取抑制率分別為(17.86±2.96)%、(28.44±7.10)%、(42.62±3.62)%和(69.02±4.03